可在生物体内自然降解的纳米级化学发光探针及其制备方法

摘要

一种可在生物体内自然降解的纳米级化学发光探针,其特征在于在化学发光试剂表面包被可溶性蛋白,其粒径小于150nm；其制备方法包括避光条件下,将可溶性蛋白溶液与化学发光试剂溶液混和,再向其中加入植物油,在0－4℃的条件下,用超声波处理,超声强度介于80－220W之间,处理时间为2－5min,并向其中加入非离子型表面活性剂,混合物呈现均匀的乳白色；(2)将所制得的乳状液分装,离心,将乳状液析出的油除去；(3)把离心后所制得的白色乳液加热固化,加热温度为50－80℃,固化时间为6－20min,在低于4℃的温度条件下保存；本发明解决单纯的化学发光试剂MCLA与氧自由基(

说明书

技术领域

本发明涉及一种可在生物体内自然降解的纳米级化学发光探针。

本发明还涉及该化学发光探针的制备方法。

背景技术

化学发光探针主要应用于检测自由基，两者之间的反应是瞬时的，剧烈的，所以目前现有的化学发光探针在体探测生物组织化学发光时，很难做到在体的实时检测，因而导致一些反应现象不能观察到，造成了实验假象。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可在生物体内自然降解的纳米级化学发光探针，解决单纯的化学发光试剂MCLA与氧自由基(¹O₂，O₂^-)之间的反应是瞬时的、短暂的，很难做到实时的长时间观测的问题。

本发明的目的还在于提供上述可在生物体内自然降解的纳米级化学发光探针的制备方法。

本发明可在生物体内自然降解的纳米级化学发光探针是在化学发光试剂表面包被可溶性蛋白，其粒径小于150nm。这样，可以延缓化学发光试剂MCLA的释放速度，可以做到较长时间的在体实时监测。同时，制作过程中所采用的包被MCLA的试剂为可溶性蛋白，它在生物体内可被自然降解。

所述可溶性蛋白包括人血清白蛋白、牛血清白蛋白、蛋清蛋白其中一种或一种以上混合物。

所述化学发光试剂包括MCLA、鲁米诺、或光泽精。

可在生物体内自然降解的纳米级化学发光探针的制备方法所需原料包括可溶性蛋白、化学发光试剂、植物油、水、非离子型表面活性剂；部分原料用量比例如下：可溶性蛋白：化学发光试剂：植物油：水＝5-50(单位mg)：10-100(单位umol/L)：2-8(单位ml)：1-4(单位ml)；非离子型表面活性剂浓度为0.2-2％重量。

其中，V_水∶V_油≤26∶74

所述可溶性蛋白包括人血清白蛋白、牛血清白蛋白、蛋清蛋白其中一种或一种以上混合物。

所述化学发光试剂包括MCLA、鲁米诺、或光泽精。

所述植物油包括花生油和/或棉籽油。

所述非离子型表面活性剂可以是Tween 80、司本80、蔗糖酯、或单甘酯。

其制备方法包括以下步骤：

(1)避光条件下，将可溶性蛋白溶液与化学发光试剂溶液混和，再向其中加入植物油，在0-4℃的条件下，用超声波处理，超声强度介于80-220W之间，处理时间为2-5min，并向其中加入非离子型表面活性剂，混合物呈现均匀的乳白色。

(2)将所制得的乳状液分装，离心，将乳状液析出的油除去。

(3)把离心后所制得的白色乳液加热固化，加热温度为50-80℃，固化时间为6-20min，在低于4℃的温度条件下保存。

制作过程中，超声处理可使人血清白蛋白分散形成微小颗粒，并使MCLA水溶液，人血清白蛋白溶液与植物油均匀混和；向其中加入非离子型表面活性剂主要是为了降低界面张力，促进乳化并维持乳液的稳定。本发明与现有技术相比具有如下优点：

1、依据本发明中所提出方法而制备的化学发光探针，粒径小于150nm，该尺寸大小保证探针可在毛细血管内均匀输运，从而形成组织中探针的均匀分布；

2、依据本发明中所提出方法而制备的化学发光探针，可根据探针在体内输运时间来调整探针尺寸，从而调整探针的最佳延时反应时间，最终达到提高检测灵敏度的目的；

3、依据本发明中所提出方法而制备的化学发光探针，探针包被物在生物体内可自然将降解；经裸鼠在体实验使用，实验动物未发生过敏及栓塞现象，证明了该制作方法的安全，无毒性；

4、依据本发明中所提出方法而制备的化学发光探针，具有制作方法简便，实验效果明显等特点。

附图说明

图1是依据本发明中所提出方法制作的纳米级化学发光探针用透射电镜所拍摄的照片。

图2是体外实验中，经蛋白包裹的化学发光探针(B)和未被蛋白包裹的化学发光探针(A)在反应延时方面比较的检测结果图。

图3是图2中经蛋白包裹的化学发光探针(B)和未被蛋白包裹的化学发光探针(A)发光强度衰减的对比图。

具体实施方式

实施例1

(1)人血清白蛋白10mg，化学发光探针MCLA浓度为20umol/L，菜籽油4m1，三蒸水2ml，非离子型表面活性剂Tween 80的浓度为1％。

(2)避光的条件下，将人血清白蛋白溶液与已稀释到使用浓度的化学发光试剂MCLA溶液混和，再向其中加入菜籽油，在0℃的条件下，用150W的超声处理1min；向其中加入浓度为1％的非离子型表面活性剂Tween 80后，继续用超声处理2min，混合物呈现均匀的乳白色。

(3)将所制得的乳状液分装，4℃的条件下，2000g/min，离心10min。离心后，轻轻将乳状液析出的油除去。此步骤重复几次，直至离心所析出的油被基本除净。

(4)把离心后所制得的白色乳液在80℃的环境中加热固化10min，避光保存于4℃冰箱待用。

实施例2

人血清白蛋白5mg，化学发光探针MCLA浓度为10umol/L，菜籽油2ml，三蒸水1ml，均匀混和；0℃的条件下，80W超声处理2min，加入浓度为0.2％的非离子型表面活性剂Tween 80后，继续用超声处理3min。将所制得的乳液分装，离心，吸去多余的油分，50℃的条件下，加热固化20min，然后，避光保存于4℃冰箱。

实施例3

牛血清白蛋白50mg，化学发光探针MCLA浓度为20umol/L，菜籽油4ml，三蒸水2ml，均匀混和；0℃的条件下，220W超声处理1min，加入浓度为0.2％的非离子型表面活性剂Tween 80后，继续用超声处理1min。将所制得的乳液分装，离心，吸去多余的油分，80℃的条件下，加热固化10min，然后，避光保存于4℃冰箱。

其中，实施例1所采用的原料、用量及条件是3个实例中最佳的。

如图所示，图1是依据本发明中所提出方法制作的纳米级化学发光探针在用日本H-300透射电镜观察时拍摄的照片。为实施例1所对应的结果，颗粒粒径大小为50-150nm。放大倍数50k。

图2是体外实验中，经人血清白蛋白包裹的化学发光探针(B)和未被包裹的化学发光探针(A)在反应延时方面的检测结果图。该实验中，纳米级化学发光探针的制作采用的是发明内容例1中所介绍的方法。

图3是图2中经人血清白蛋白包裹的化学发光探针(B)和未被包裹的化学发光探针(A)发光强度衰减对比图。可以看出，未被包裹的化学发光探针发光衰减快，13min就基本衰减到本底；而经人血清白蛋白包裹的化学发光探针衰减缓慢，测量20min仍有微弱的发光。根据该实验结果，可见经蛋白包裹的化学发光探针比未被包裹的探针有较明显的发光延时。