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法律状态
2006-07-26
专利权的终止未缴年费专利权终止
专利权的终止未缴年费专利权终止
1995-05-17
授权
授权
1993-12-08
公开
公开
1993-11-24
实质审查请求的生效
实质审查请求的生效
本发明涉及一种抗生素、该抗生素的制备方法以及一种有效成分为该抗生素的畜禽消化道疾病防治药物,属于抗生素类的制备和应用。
以往,畜牧业上常用的防治鸡白痢病,畜禽肠炎,腹泻类等消化道疾病的抗生素药类是土霉素、氯霉素等。这些药剂的使用存在以下缺陷:一、这些药物是人畜共用的药剂,它容易引起药物交叉耐药,从而影响人的治疗效果;二、这些抗生素药物由于长期使用,目前已经普遍产生了耐药性问题,治疗效果降低;三、为取得治疗效果而增大剂量,使用后往往由于这些抗生素药物在畜禽产品中残留过量,从而造成畜禽产品卫生质量标准,影响了出口创汇。因此目前畜禽生产上迫切需要研究开发一种新型的既有强选择效果,又安全可靠的替代产品。
本发明的目的在于提供一种新的抗生素和制备方法,并提供一种含该抗生素的防治畜禽疾病的药物,以取代目前使用的抗生素药类,基本上消除现有药类使用后的畜禽抗药性和过量使用给人类带来的影响。
本发明所述的抗生素,分子式为C11H14O6,分子量242,结构式为
元素分析:C-51.76%,H--5.56%,不含氯、氮、溴、 氟和硫元素。
紫外吸收:λEtoHmax252>
红外光谱主要吸收峰为:3430、1780、1720、1655、1270、1190、1110、985、820cm-1。
溶解性:不溶于水、正己烷、低沸点石油醚;易溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙酸乙酯等有机溶剂。
薄层色谱:溶剂乙酸乙酯-1,2二氯乙烷(2∶1),Rf值0.57;溶剂氯仿-甲醇(8∶1),Rf值0.37;溶剂乙醚-氯仿(3∶1),Rf值0.22。
经检索,在已知的抗生素中,未发现有相同者,因而认为是一种新的抗生素。
该抗生素的抗菌谱:
菌株 最低抑制浓度(ppm)
蜡状芽孢杆菌A836 <0.78
藤黄八叠球菌 <0.78
金色葡萄球菌2098 <0.78
肺炎杆菌 0.78
粪产碱杆菌 6.25
啤酒酵母 >100
鸡白痢沙门氏菌 <1.0
巴氏杆菌 <1.0
猪大肠杆菌 <1.0
制备上述抗生素的方法,包括菌种培养和抗生素的提取。
一、菌种培养
(一)菌种:本发明所用的微生物菌种为玫瑰黄链霉菌杭州 新亚种(Streptomyces roseoflavus subsp.hangzhouensisn.subsp.),保藏于CGMCC,保藏号0184,保藏日1992年11月23日。
玫瑰黄链霉菌杭州亚种是从中国浙江省杭州地区土壤中分离得到的,编号为633,它具有下述菌学特性:
1.形态特征:
在含有1%葡萄糖,1%酵母浸膏的菌体分析用培养基上培养本菌株,再用6N盐酸在110℃加热水解18小时,水解物经薄层分析及纸层分析均可检出LL-二氨基庚二酸,但未发现M-二氨基庚二酸。
用电子显微镜可以观察到在琼脂平板上成长的气生菌丝体呈螺旋状,孢子表面光滑,呈椭圆形,孢子锁在气生菌丝的前端形成众多的链状。
2.在各种培养基上的成长状态:
28℃培养20天,颜色按照《色谱》(中国科学院色谱委员会编,科学出版社出版,北京,1957年)并参照《链霉菌鉴定手册》(中国科学院微生物所放线菌分类组编,科学出版社出版,北京,1957年)记述如下:
表1 链霉菌633的培养特征
培养基 培养特征
气丝 淡黄(Id 23')-淡粉(IIb 13')
高氏1号 基丝 粉白-赭石
色素 瓜瓤粉
气丝 淡粉(IIb 12')-淡红灰
查氏蔗糖 基丝 淡茧黄-灰暗
色素 淡黄
气丝 莲子白-浅灰黄(Ib 64')-尘灰
克氏1号 基丝 象牙黄-炒米黄
色素 痕量黄色
气丝 浅灰黄(Ib 64')-淡粉(Id 41')
葡糖天冬素 基丝 豆汁黄-淡茧黄
色素 微黄
气丝 银鼠灰
马铃薯块 基丝 炒米黄
色素 无
气丝 淡白-浅黄(Id 23')-玫瑰粉
燕麦粉 基丝 淡粉
色素 微黄
气丝 瓜瓤粉
无机盐淀粉 基丝 淡瓜瓤粉(Id 13')
色素 微黄
气丝 灰白-尘灰
甘油天冬素 基丝 淡茧黄
色素 微黄
气丝 淡黄灰(IIc 22')-藕荷
酪氨酸 基丝 瓜瓤粉
色素 无
气丝 黄灰(IIc 34')-褐色玫红
苹果酸钙 基丝 瓜瓤粉
色素 微黄
3.糖的利用:
链霉菌No.633对葡萄糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、L-鼠李糖、乳糖、半乳糖、麦牙糖、D-甘露糖、甘油、糊精和柠檬酸钠可利用;不利用D-果糖、蔗糖、棉子糖、i-肌醇、菊糖、卫茅糖、山梨糖、七叶树素和醋酸钙;对甘露醇的利用可疑。
4.其他生理性质:
本菌株对淀粉水解、脱脂乳的胨化的明胶液化呈阳性;对牛乳凝固、纤维素生长和H2S的产生呈阴性。
按照形态特征为主、生理生化特性为辅的原则,该链霉菌与已知菌比较结果表明,该菌株与Streptomyces roseoflavus的形态及培养特征基本相似,但也存在显著差异,故定名为玫瑰黄链霉菌杭州新亚种(Streptomyces roseoflavus subsp.hangzhouensis n.subsp.)。
(二)培养基:培养基中的营养源采用常用的碳源、氮源。其中碳源可为淀粉、糊精、饴糖、甘油、葡萄糖、蔗糖、乳糖等。氮源可为蛋白胨、大豆粉、肉膏、麸皮、尿素、玉米浆、铵盐以及其他有机无机化和物。至于其他营养源可适当添加一 些无机盐类,例如食盐、磷酸盐以及钾、钙之类的金属盐类,必要时也可以添加一些植物油或矿物油等作为消泡剂。
(三)培养方法:
本发明所述的抗生素可采用常规方法,通过发酵培养玫瑰黄链霉菌杭州新亚种而制得。培养方法为液体发酵培养,为了有利于工业性生产,宜将上述生产菌种的孢子悬浮液或者培养液接种到培养基上,并通过通气搅拌来加以培养。亦可以通过固体培养制得该菌剂。
培养温度以27-30℃为宜,pH值为6.5-7.2为宜,培养时间65-72小时。当然所有条件可根据所使用菌株的内、外条件而进行适当的调节,以获得最好的效果。
二、抗生素的提取:
由上述菌株发酵所得的培养物出发,利用该抗生素与其杂组份之间溶解度、离子交换能力、吸附的亲和力及分子量等方面的差别,通过各种溶剂萃取、离子交换层析、凝胶层析、吸附层析、液相层析、纤维素层析等常规方离手段,或这些分离方法的组合,即可制得抗生素精品。
本发明所述的防治药物,有效成份为上述抗生素,用于畜禽消化道疾病的防治,可用该技术领域中已知的固相载体、液相载体及乳化分散剂来制成不同的制剂。可以配制成粉剂、颗粒剂、片剂、液剂、油剂、乳化剂、针剂等任意剂型。其中,固相载体可为淀粉、硫酸钙、麸皮、米糠、高岭土、硅藻土、纤维素、酸性白土的一种或任意组合;液相载体可为乙醇、乙酸乙酯、丁酸乙酯、1,2-二氯乙烷、丙酮、该菌种发酵液的浓缩液等。
一般而言,各制剂中有效成分抗生素的重量百分比为0.01-1%,可根据不同的使用目的适当地增加或减少。
此外,本发明的制剂还可与其他杀菌剂、驱虫剂、抗生素、合成类药物、酶制剂、生长调节剂以及营养源物质配合使用。
本发明的优点和积极效果:
1.本发明抗生素和有效成份为该抗生素的畜禽用防治药物对生产上频发的沙门氏、杆菌、大肠杆菌、巴氏杆菌、异刺线虫等疾病具有较广谱的防治功能,在其他抗生素、磺胺类药物防治无效或效果较差的群体中能取得控制病情的预期效果,还可提高饲料转化率,有明显的增重效果,连续使用未发现毒副反应或厌食现象。
2.本发明提供的抗生素制备方法,操作简便、成本低廉、安全可靠、原料易得,是一种有效的制备途径。
表2 使用抗生素的防治效果
组别 病别 数量 日齡 观察(天) 死亡率 成活率
0.5%633 鸡白痢 30 5-19 14 3 90
0.02%痢特灵 鸡白痢 30 5-19 14 11 63.3
接种不给药 鸡白痢 30 5-19 14 25 16.3
不接种不给药 鸡白痢 30 5-19 14 0 100
组别 病别 数量 日龄 发病率 防治率 治愈率
1%633 鸡白痢 300 30 60 95 93.5
1%633 鸡肠炎 475 65 70 97 95
1%633 鸭霍乱 200 40 99.5 97
1.5g 633/头 仔猪白痢 193 62.3 95.2 94.5
1.9g 633/头 仔猪黄痢 151 84 94 79
5g 633/头 仔猪腹泻 210 67.1 97.1 95.7
注:1.表中所列633即为本发明所述抗生素的制剂,每克含有效成份40微克;
2.表中死亡率、成活率、发病率、防治率、治愈率均以%表示。
表3 抗生素对雏鸡的增重效果
单位:克
组别 数量 试验天数 试前均重 试后均重 增重指数
633组 2875 20 89.4 628.1 106.1
普通对照 1880 20 90.7 589.0 100
633组 1088 24 122.5 925.0 113.8
土霉素组 6579 24 122.5 827.5 100
附图说明:
图1为之江菌素633的紫外吸收光谱;
图2为之江菌素633的红外吸收光谱;
图3为之江菌素633的HNMR图(CDCL3);
图4为之江菌素633的′HNMR图(CDCL3+D2O);
图5为之江菌素633的BB+DEPT-13C>
图6为之江菌素633的EIMs图;
图7为之江菌素633的FABMs图。
下面就本发明的实施、制造过程进行详细地阐述,这并不意味着对本发明有所限定。
例中所用(%)、(∶)分别表示重量%,重量比。
实施例1 抗生素的制备
以番薯淀粉3.5%,黄豆饼粉2.5%,硫酸镁0.05%,碳酸钙0.07%的配比制成的培养基400升,将上述玫瑰黄链霉菌杭州新亚种菌株接种于该培养基中,并置于28℃搅拌培养65小时,即获得含抗生素633的发酵液。
将发酵液滤去菌丝体,滤液用乙酸乙酯提取,弃去水相。乙酸乙酯相于60℃减压后上硅胶H干柱进行粗分离,洗脱液为乙酸乙酯1,2-二氯乙烷(1∶2),分步收集。各收集管经TLC检测和生物活性测定,合并富含抗生素633并对鸡沙门氏菌有抗菌活性的收集管,减压浓缩后得抗生素633粗品Ⅰ,粗品Ⅰ上硅胶H干柱进一步分离,洗脱液为乙酸乙酯-1,2-二氯乙烷(1∶8),分步收集后同上法进行检测,合并浓缩,即得抗生素粗品Ⅱ,最后利用10×20cm硅胶薄层层析对粗品Ⅱ进行制备性TLC层析纯化,展开剂为乙酸乙酯-1,2-二氯乙烷(2∶1)。展开后刮下板上的抗生素633组份所在区段的硅胶,装填于1.0×20cm玻璃层析柱,用乙酸乙酯洗脱,洗脱液于60℃减压浓缩至干,得抗生素633精品。
含抗生素633的畜禽疾病防治药物的制备。
实施例2 粉剂一
将含抗生素633的发酵液吸附于固相载体番薯淀粉,然后在60℃减压沸腾干燥,含水量小于10%,粉碎即成。
实施例3 粉剂二
将含抗生素633的发酵液,吸附于固相载体碳酸钙,然后在60℃减压沸腾干燥,含水量小于10%,粉碎即成。
实施例4 粉剂三
将含抗生素633的发酵液,吸附于固相载体番薯淀粉∶碳酸钙(1∶1),然后在60℃减压沸腾干燥,含水量小于10%,粉碎即成。
实施例5 粉剂四
将含抗生素633的发酵液,吸附于固相载体玉米淀粉∶碳酸钙∶麸皮(1∶1∶1),然后在60℃减压沸腾干燥,含水量小于10%,粉碎即成。
实施例6 粉剂五
将含抗生素633的发酵液,吸附于固相载体碳酸钙∶麸皮(1∶1),然后在60℃减压沸腾干燥,含水量小于10%,粉碎即成。
实施例7 粉剂六
将含抗生素633的发酵液,吸附于固相载体麸皮∶硅藻土(或酸性白土、高岭土、纤维素及粕类等物质)(2∶1),然后在60℃减压沸腾干燥,含水量小于10%,粉碎即成。
实施例8 液剂
将含抗生素633的发酵液,采用薄膜浓缩或减压浓缩成高浓度抗生素633液体菌剂,加入适量防腐剂即成。
实施例9 乳剂
将含抗生素633的发酵液,用乙酸乙酯或氯仿萃取,减压浓缩,加入乳化剂制得。
机译: 药物制剂的制备方法,由此形成的制剂以及用于这些制剂的头孢菌素衍生物的制备方法。
机译: 药物制剂的制备方法,由此形成的制剂以及用于这些制剂的头孢菌素衍生物的制备方法。
机译: 药物制剂的制备方法,由此形成的制剂以及用于这些制剂的头孢菌素衍生物的制备方法。