带有双标签猪细小病毒全长感染性克隆制备方法及应用

摘要

本发明提供了一种带有His和Flag双标签的猪细小病毒(PPV)全长感染性克隆的制备方法，包括如下步骤：1)以PPV DNA为模板，分别使用序列如SEQ ID NO.1～2、SEQ ID NO.3～4所示引物扩增，再将所得扩增产物为模板，以序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.4所示引物进行融合PCR扩增，得F3片段；2)将pKQLL‑T质粒经Stu I和SnaB I产生平末端切口的限制性内切酶线性化质粒，再将F3片段与其连接，得重组质粒；3)使用限制性内切酶BamH I和Xba I双酶切重组质粒，回收带有His和Flag双标签的PP PPV全长片段；4)将带有His和Flag双标签的PPV全长片段转染动物细胞，即可。本发明的方法能够成功产生高滴度的PPV，可用于抗猪细小病毒药物的筛选，具有良好的应用前景。