遗传工程细胞的多元性产生和条形码编制

摘要

本公开涉及使用RNA引导的核酸酶和基因组条形码多元性产生遗传工程细胞和并进行表型分型。具体地，采用通过同源介导修复促进所需靶染色体基因座处精确基因组编辑的系统实现高通量多元性基因组编辑。向导RNA和供体DNA序列作为基因组条形码在不同的染色体基因座整合，可允许从转化子池中鉴定、分离和大规模平行验证单独变体。菌株能根据其精确遗传修饰进行排列，如供体DNA掺入异源或天然基因所指定。本公开还涉及一种典型向导RNA识别区外的密码子编辑方法，其使蛋白编码基因的完全饱和突变可行，一种基于标记的内部克隆方法，其移除由寡核苷酸合成错误和不完全载体骨架切割导致的背景，以及一种通过活跃的供体募集来提高同源介导修复的方法。