无机磷酸盐刺激瓣膜间质细胞成骨分化的验证方法

摘要

一种无机磷酸盐刺激瓣膜间质细胞成骨分化的验证方法，包括：在提取大鼠瓣膜间质细胞分别使用CON、IP‑OIM与OIM进行成骨分化培养后，提取蛋白制成蛋白样品；对三种蛋白样品分别使用ALP染色、茜素红染色后，采用ALP活性检测以及相对钙含量测定方法评估染色后的成骨分化程度，并通过WB法、RT‑PCR法分别检测BMP‑2、RhoA及Rock‑1的表达变化；通过si‑RNA技术分别干扰BMP‑2及RhoA的表达，并观察其相互之间变化的关系，以及干扰后是否有对抗成骨分化的作用；研究IP‑OIM对SMAD1/5/9磷酸化的影响，以及BMP‑2/SMAD1/5/9以及RhoA/Rock‑1两条通路之间的相互关系。本发明确定无机磷酸盐通过BMP‑2/smad1/5/9以及RhoA/Rock‑1信号通路引起瓣膜间质细胞的钙化形成，及在瓣膜间质细胞成骨分化过程中BMP‑2/SMAD1/5/9通路是RhoA/Rock‑1通路的上游通路，并且起着正向调控的作用。