MAP3K8基因敲除PK-15细胞系的构建方法及其应用

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及MAP3K8基因敲除PK‑15细胞系的构建方法及其应用。MAP3K8基因敲除的PK‑15细胞系PK‑15‑KO‑MAP3K8的保藏编号为CCTCC NO:C2019176。该细胞系的构建方法包括1：根据猪源MAP3K8基因序列分别设计两条sgRNA，将双链sg RNA与酶切后的lentiGuide‑EGFP载体连接得到重组慢病毒表达质粒lentiGuide‑EGFP‑MAP3K8‑sg RNA；2：将重组慢病毒表达质粒、病毒包装辅助质粒共转染PK‑15细胞；3：收集病毒液，过滤、超速离心浓缩纯化病毒；4：用感染复数MOI=30的慢病毒感染PK‑15细胞，然后用超速流式细胞分选系统进行单细胞分选；5：将分选得到的单克隆细胞进行扩大培养并测序鉴定。该细胞系能够促进FMDV和SVV增殖，提高病毒产量，可用于FMDV和SVV疫苗株的大规模细胞化培养和生产，并可为研究MAP3K8在病毒感染过程中的作用机制提供有力工具。