一种止癌痛中草药组合物及其制备方法与应用

摘要

本发明提供了一种止癌痛中草药组合物及其制备方法与应用，通过以华佗豆、苦玄参、合欢皮以及焦栀子为原料，采用水提取和醇提取等多种提取方法提取有效部位或有效成分并精制后，与药学上可接受的赋形剂制成胶囊剂或片剂及溶液、悬浮液、乳状液、霜剂、膏状、凝胶、或喷剂；本发明药物具有祛瘀毒、通络止痛、镇静安神之功效，可用于晚期癌症患者的止痛治疗及其它止痛治疗。

说明书

技术领域

本发明属于中药领域，尤其涉及一种止癌痛中草药组合物及其制备方法与 应用。

背景技术

癌症是当今乃至以后严重威胁人类健康的头号杀手，据2014年世界卫生组 织(WHO)发布的《世界癌症报告》称，中国的癌症在2012年的发病个案几乎占 了全球一半，高居第一位，并预测2035年全球新癌症病例将增加近一半，防治 形势相当严峻。尽管新的诊疗技术不断应用于临床，但“谈癌色变”的现状依 旧没有改变。特别在晚期癌症患者中，难以忍受的疼痛使病人烦燥和绝望，医 生和家属眼睁睁地看着自已的病人和亲人在无以言状的痛苦中走完人生的最后 一程而束手无策。因此，有效地控制和治疗癌性疼痛已成为临床治疗癌症急需 攻克的世界性难题之一。目前，临床上用于晚期癌症疼痛治疗的药多以吗啡类 化学合成药为主，虽使患者的疼痛得到明显减轻，但阿片类镇痛药皆存在如耐 受性、依赖性、急性中毒等毒副反应，同时其用药受特殊药品管理而使大多数 患者得不到及时、有效的止痛治疗而痛不欲生，而中成药在临床上用于晚期癌 症止痛治疗的、特别是无成瘾性、不受特殊药品管理的中成药还处于空白状态。

发明内容

本发明的目的在于提供一种止癌痛中草药组合物及其应用，旨在解决上述 背景技术中的不足。

本发明是这样实现的，一种止癌痛中草药组合物，该组合物是以包括以下 按质量份计的各组分制备而成：华佗豆3～5份、苦玄参2～3份、合欢皮2～4份、 焦栀子1～3份。

优选地，所述止癌痛中草药组合物是以包括以下按质量份计的各组分制备 而成：华佗豆4份、苦玄参2份、合欢皮2份苦、焦栀子2份、

本发明进一步提供了上述止癌痛中草药组合物的制备方法，包括以下步骤： 将3～5份华佗豆、1～3份焦栀子、2～4份合欢皮以及2～3份苦玄参置多能提取锅 中水提取两次，每次加水10倍量、提取二小时，水提取液合并浓缩至相对密度 1.15～1.18得到水提取膏，加入95％乙醇调含醇量至70％，搅匀后静置24小时， 取上清液回收乙醇、浓缩至相对密度1.20～1.25，与20份淀粉混匀、置于85℃～ 90℃烤箱中干燥8～10h，得到止癌痛中草药组合物。

本发明进一步提供了上述止癌痛中草药组合物的又一制备方法，包括以下 步骤：

(1)将3～5份华佗豆粉碎成粗粉，用70％乙醇湿润后装于渗滤筒中，加70％ 乙醇浸泡24小时后，按渗滤法渗滤，渗滤液回收乙醇、浓缩至相对密度1.15～1.18 得到醇提取膏，备用；

(2)将1～3份焦栀子、2～4份合欢皮以及2～3份苦玄参置多能提取锅中加 水10倍量进行水提取两次，每次各二小时，水提取液浓缩至相对密度1.15～1.18 得到水提取膏，加入95％乙醇调含醇量至70％，搅匀后静置24小时，取上清液 回收乙醇、浓缩得到水提醇沉膏，备用；

(3)将步骤(1)中的醇提取膏和步骤(2)中的水提醇沉提取膏合并浓缩 至相对密度1.20～1.25，与20份淀粉混匀、置于85℃～90℃烤箱中干燥8～10h， 得到止癌痛中草药组合物。

本发明进一步提供了上述止癌痛中草药组合物在制备癌症辅助治疗药物 的应用，所述癌症辅助治疗药物为止癌痛中草药组合物与药学上可接受的赋形 剂制成胶囊剂或片剂及溶液、悬浮液、乳状液、霜剂、膏状、凝胶、或喷剂。

为克服现有技术的缺点和不足，本发明提供了一种止癌痛中草药组合物及 其制备方法与应用，本发明通过以华佗豆、苦玄参、合欢皮以及焦栀子为原料， 采用水提取和醇提取等提取方法提取有效部位或有效成分并精制后，与药学上 可接受的赋形剂制成胶囊剂或片剂及溶液、悬浮液、乳状液、霜剂、膏状、凝 胶、或喷剂；本发明药物具有祛瘀毒、通络止痛、镇静安神之功效，可用于晚 期癌症患者的止痛治疗及其它止痛治疗。

本发明率先应用华佗豆、焦栀子、合欢皮、苦玄参并优选各组分用量，其 主药有效成分化学结构与已知的吗啡化学结构完全不同，是一具有光学活性的 新型生物碱，用分步提取方法提取、精制，获得较好止痛效果，经动物药效学 研究试验和临床病例应用，取得较好临床止痛效果，大大方便晚期癌症患的止 痛用药，为晚期癌症患者提供安全、高效、无成瘾性、不属特殊药品管理的新 型止痛中成药，开创绿色止痛新时代。

相比于现有技术的缺点和不足，本发明具有以下有益效果：

1、本发明所用原药材无罂粟壳、草乌等特殊管理药材、有毒药材，不属特 殊药品管理的中成药制剂，均为可种植再生的中草药提取制成，药材来源广泛、 易于获取。

2、本发明以中草药提取制成，与目前临床上所用的化学合成止痛药截然不 同，其主药有效成分的化学结构与已知的止痛药化学结构完全不同，为一具有 光学活性的新型生物碱，在治疗疼痛的同时，有效缓解病人烦躁不安、恐惧等 不良情绪，增强病人战胜疾病的信心。

3、本发明可让病人根据自身病情自行服药、控制的疼痛的发生、发展，较 为客观的满足个体对止痛药的要求，不仅使镇痛效果趋于完善，而且克服了传 统用药不及时、用药受控制等缺点，开创绿色止痛新时代，造福患者。

4、本发明具有疗效确切、毒副作用少、无成瘾性、不属特殊药品管理、能 满足临床急需等优势。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例， 对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以 解释本发明，并不用于限定本发明。

实施方案1

称取华佗豆4份、苦玄参2、份焦栀子2份、合欢皮3份，以上四味，置多 能提取锅中水提取两次，每次加水10倍量、提取二小时，水提取液合并浓缩至 相对密度1.15～1.18得到水提取膏，加入95％乙醇调含醇量至70％，搅匀后静置 24小时，取上清液回收乙醇、浓缩至相对密度1.20～1.25，与适量淀粉混匀、置 于烤箱中(85℃～90℃)干燥、得到止癌痛中草药组合物(生药)。

实施方案2

称取华佗豆5份、苦玄参3份、合欢皮4份、以上三味，分以下步骤进行：

(1)将华佗豆粉碎成粗粉，用70％乙醇湿润后装于渗滤筒中，加70％乙醇 浸泡24小时后，按渗滤法渗滤，渗滤液回收乙醇、浓缩至相对密度1.15～1.18 得到醇提取膏，备用；

(2)将苦玄参、合欢皮置于多能提取锅中加水10倍量进行水提取两次，每 次各二小时，水提取液浓缩至相对密度1.15～1.18得到水提取膏，加入95％乙醇 调含醇量至70％，搅匀后静置24小时，取上清液回收乙醇、浓缩得到水提醇沉 膏，备用；

(3)将步骤(1)中的醇提取膏和步骤(2)中的水提醇沉提取膏合并浓缩 至相对密度1.20～1.25，与适量淀粉混匀、置于烤箱中(85℃～90℃)干燥、得 到止癌痛中草药组合物(生药)。

实施例3

称取华佗豆3份、苦玄参2份、合欢皮2份、焦栀子2份，以上四味，置 多能提取锅中水提取两次，每次加水10倍量、提取二小时，水提取液合并浓缩 至相对密度1.15～1.18得到水提取膏，加入95％乙醇调含醇量至70％，搅匀后静 置24小时，取上清液回收乙醇、浓缩至相对密度1.20～1.25，与适量淀粉混匀、 置于烤箱中(85℃～90℃)干燥、得到止癌痛中草药组合物(生药)。

实施方案4

称取华佗豆4份、苦玄参3份、合欢皮3份、焦栀子2份，分以下步骤进行： (1)将华佗豆粉碎成粗粉，用70％乙醇湿润后装于渗滤筒中，加70％乙醇浸泡 24小时后，按渗滤法渗滤，渗滤液回收乙醇、浓缩至相对密度1.15～1.18得到醇 提取膏，备用；

(2)将苦玄参、合欢皮置于多能提取锅中加水10倍量进行水提取两次，每 次各二小时，水提取液浓缩至相对密度1.15～1.18得到水提取膏，加入95％乙醇 调含醇量至70％，搅匀后静置24小时，取上清液回收乙醇、浓缩得到水提醇沉 膏，备用；

(3)将步骤(1)中的醇提取膏和步骤(2)中的水提醇沉提取膏合并浓缩 至相对密度1.20～1.25，与适量淀粉混匀、置于烤箱中(85℃～90℃)干燥、得 到止癌痛中草药组合物(生药)。

实施例5

称取华佗豆5份、苦玄参2份、合欢皮4份、焦栀子1份，以上四味，置 多能提取锅中水提取两次，每次加水10倍量、提取二小时，水提取液合并浓缩 至相对密度1.15～1.18得到水提取膏，加入95％乙醇调含醇量至70％，搅匀后静 置24小时，取上清液回收乙醇、浓缩至相对密度1.20～1.25，与适量淀粉混匀、 置于烤箱中(85℃～90℃)干燥、得到止癌痛中草药组合物(生药)。

效果实施例1单方及其复方小鼠灌胃给药急性毒性预试验

1、试验目的

小鼠单次灌胃给予单方醇提取物、实施例3制备的胶囊(复方1)、实施例 2制备的胶囊(复方2)，供试品进行急性毒性试验，观察小鼠急性毒性反应情 况，并为其处方选择提供参考依据。

2、供试品

单方(单味醇提取物)，6.74g生药/kg粉，批号：20130111-2

复方1，5.88g生药/kg粉，批号：20130111-3

复方2，7.41g生药/kg粉，批号：20130408-1

3、主要试验仪器

电子天平型号：ML104，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司

电子天平型号：E1200-1，生产厂家：常熟市双杰测试仪器厂

4、实验动物

ICR小鼠，体重：18～20g，100只，雌雄各半，北京维通利华实验动物技术 有限公司提供，生产单位许可证编号：SCXK(京)2012-0001，实验动物质量 合格证编号：11400700027279，接收日期：201311126

5、动物饲养与管理

饲养环境：天津市新药安全评价研究中心实验动物屏障系统。温度：20～ 26℃，湿度：40～70％，光照：12小时明、12小时暗，通风：≥15次/小时全 新风，实验动物使用许可证号：SYXK(津)2011-0005。

动物食用SPF大小鼠饲料，批号：2013110、2014101、2014102，天津市华 荣实验动物科技有限公司提供，生产许可证号：SCXK(津)2012-0001。

动物刨花垫料，灭菌方式：60Co辐照，供应商：北京科澳协力饲料有限公 司。

动物饮用使用1T/h型多重微孔滤膜过滤系统制备的无菌水(四级过滤紫外 灭菌)。

动物管理由动物保障部负责，除禁食外，每天为动物提供足够的饲料和饮 用水。饮水瓶每天更换一次。动物饲养笼内垫料一般情况下根据动物生长情况 每日或隔日更换一次，特殊情况随时更换。饲养笼具每周更换一次，特殊情况 及时更换。消毒方法为0.1％新洁尔灭、0.1％过氧乙酸和84消毒液(1∶250)3 种消毒液轮流使用，每种使用一周。

6、实验设计

6.1组别设置

根据前期预试验结果，实验设生理对照组、单方组、复方1组和复方2组， 共4组，每组10只，雌雄各半。

6.2剂量设计及选择理由

根据前期预试验，小鼠单次灌胃给予单方醇提取物24g生药/kg，动物未见 死亡，因此本试验各组设置剂量分别为单方组24g生药/kg，其中单方在复方1 中所占比例为45.5％，因此，复方1设计试验剂量为52.7g生药/kg；其中单方在 复方2中所占比例为52.6％，因此，复方2设计试验剂量为45.6g生药/kg。

6.3给药途径

单方拟临床用药途径为口服给药，根据《中药、天然药物急性毒性研究技 术指导原则》(指导原则编号：[Z]GPT2-1)要求，本试验采用灌胃给药。

6.4给药周期

单次给药。

7.试验方法7.1.动物接收与检验

7.1.1动物接收

实验动物到来后，试验人员、兽医和动物保障部门一同接收。接收时首先 查看运输工具符合要求，动物供应单位提供的动物合格证明，并确认合格证内 容与申请购买的动物种属、级别、数量和性别一致。然后检查外包装符合要求 及动物外包装未有破损。动物外包装经酒精喷雾消毒，由第三传递柜紫外灯照 射3分钟后传入检疫室。试验用具和实验记录经第四传递柜传入。

7.1.2检验

在检疫室打开动物外包装，核对动物性别及数量与动物合格证明所载事项 一致。用记号笔在鼠尾标记动物检疫号，然后逐一对动物进行外表检查(包括 性别、体重、头部、躯干、尾部、四肢、皮毛、精神、活动等)，并填写《试 验动物接收单》和《动物接收检验单》。动物检验后放入动物饲养笼中，雌雄 分养，在笼具上悬挂检疫期标签，然后放在检疫室中进行适应期饲养。不合格 动物处死后经缓冲区移出放入尸体暂存冰柜中等待处理。

7.1.3动物适应期观察

动物适应饲养期限为3天。分别在接收动物当日和适应饲养的最后一天对 动物进行全面检查，包括体重、头部、躯干、尾部、四肢、皮毛、精神、活动 等。适应期未发现异常动物。

7.2动物分组与标示

7.2.1分组方法

经适应期最后1天全面检验、剔出异常动物后，将剩余动物的检疫号和体 重对应输入计算机中排序。选择状态良好、体重适中的雌雄动物各40只用于分 组，按区组随机分组方法将动物分为4组，生理对照组、单方组、复方1组和 复方2组，每组10只，雌雄各半。

7.2.2标示方法

按区组随机分组表的检疫号-组别-动物号对应表将动物放入饲养笼内，每笼 5只，雌雄分开，并用苦味酸溶液对动物进行标记。在笼具上悬挂动物笼具标示 标签。将分组和标示完成的动物转移到饲养观察室中饲养，并在观察室门上悬 挂试验研究项目标示。试验研究项目标示内容应包括研究机构名称、专题编号、 实验周期、实验人员和专题负责人及联系电话。

7.3药物配制与给药

7.3.1药物配制

药物用去离子水配制，各单方及其复方配制复方如下表1所示：

表1 单方及其复方配制方法表

7.3.2给药

于给药日单次灌胃给药，给药前禁食4～6h，给药体积40ml/kg。

7.4检查指标

7.4.1一般观察

给药后连续观察2～4小时，以后每天观察记录1次，共观察14天。观察内 容包括动物运动情况、眼睑指征、抽搐反应、呼吸、皮毛、排泄物和分泌物等。 记录动物中毒症状及中毒反应的起始时间、严重程度、持续时间等。

7.4.2死亡情况

观察并记录实验期间各组动物的死亡情况，详细登记在死亡记录表上。

7.4.3体重检查

在给药前和给药后的1、3、7和14天称重。

7.4.4解剖检查

在试验过程中的任何死亡和濒死动物及时进行解剖检查，在给药后14天对 所有存活动物进行解剖检查。

7.5数据统计处理

体重：计算各组动物体重的平均值和标准差(雌雄合并统计)，采用组间t 检验，观察药物对动物体重的影响。

8.试验结果

8.1一般观察

生理对照组动物在给药后的14天观察期内未见任何异常。

单方组、复方1组和复方2组，药后20分钟后小鼠活动减少，药后2h状 态均恢复正常。

8.2死亡情况

试验期间无动物死亡。

8.3体重检查

单方组、复方1组和复方2组小鼠体重与生理对照组比较均无明显差异(见 表2)。

表2  对小鼠体重的影响(g，n＝10)

8.4解剖检查

8.4.1生理对照组

药后14天对10只存活小鼠剖检，各只小鼠头部、体表、皮下及颈部检查 均未见异常，胸腔、腹腔浆膜光滑无积液，心、肺、脑、肝、肾、脾、胃、肠、 胸腺、胰腺、性腺及膀胱等脏器色泽、体积和质地正常，未见异常改变。

8.4.2药物组

药后14天对30只存活小鼠剖检：动物各项大体观察指标未见异常改变。

9.影响研究可靠性和造成研究工作偏离实验方案的异常情况

无

10.实验结论

小鼠单次灌胃给予单方及复方后，药后20分钟左右出现运动减少，药后2h 状态均恢复正常；在恢复观察14天内未见动物死亡，观察期结束时大体解剖中 均未见异常改变，单方醇提取物小鼠灌胃给药的剂量为24g生药/kg；复方1小 鼠灌胃给药的剂量为52.7g生药/kg；复方1小鼠灌胃给药的剂量为45.6g生药/kg， 动物均未见死亡。研究结果表明，复方中的其他成份未增加单方的毒性。

效果实施例2：单方及复方药效学预试验研究

1、供试品及阳性对照药

1.1供试品

单方(单味醇提取物)，6.74g生药//g粉，批号：20130111-2

复方1，5.88g生药/g粉，批号：20130111-3

复方2，7.41g生药/g粉，批号：20130408-1

提供单位：天津药物研究院中药现代研究部

1.2阳性对照药

硫酸吗啡缓释片(美施康定)：批号1212072，规格10mg/片，萌蒂(中国) 制药有限公司。

盐酸曲马多胶囊(舒敏)：批号，规格50mg/片

乌金活血止痛胶囊：批号130105，规格0.3g/粒，云南龙发制药有限公司。

2、主要试验仪器

电子天平型号：ML104，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司

电子天平型号：E1200-1，生产厂家：常熟市双杰测试仪器厂

HSS-1B型恒温浴槽(又名HSS-1B型离体肠管及热板实验恒温装置，成都 仪器厂)

3、剂量设计及给药方式的选择

给药途径：灌胃给药(ig)

给药体积：小鼠0.2ml/10g

剂量设计：根据该药用于临床验方中的使用量。单方临床验方用量为30g/ 人/天，人体重以70kg计算，按体表面积折算为小鼠等效剂量为5g生药/kg；其 中单方在验方中所占比例为30％，因此，单方醇提工艺供试品设计实验剂量为： 小鼠1.5、0.75g生药/kg；

其中单方在复方1中所占比例为45.5％，因此，复方1设计实验剂量为：小 鼠3.3、1.65g生药/kg；

其中单方在复方2中所占比例为52.6％，因此，复方2设计实验剂量为：小 鼠2.8、1.4g生药/kg；

选择理由：本供试品临床给药途径为口服，保持和临床给药途径一致，采 用灌胃给药方式进行研究。

4、实验动物

4.1小鼠

种属：ICR小鼠，体重：18～20g，100只，雌雄各半，北京维通利华实验动 物技术有限公司提供，生产单位许可证编号：SCXK(京)2012-0001，实验动 物质量合格证编号：11400700027279，接收日期：201311126

4.2小鼠

种属：ICR小鼠，体重：18～20g，100只，雌性，北京维通利华实验动物技 术有限公司提供，生产单位许可证编号：SCXK(京)2012-0001，实验动物质 量合格证编号：11400700031942，接收日期：20131231

4.3小鼠

种属：ICR小鼠，体重：18～20g，100只，雌雄各半，北京维通利华实验动 物技术有限公司提供，生产单位许可证编号：SCXK(京)2012-0001，实验动 物质量合格证编号：11400700035114，接收日期：20140211

4.4小鼠

种属：ICR小鼠，体重：18～20g，110只，雌雄各半，北京维通利华实验动 物技术有限公司提供，生产单位许可证编号：SCXK(京)2012-0001，实验动 物质量合格证编号：11400700035089，接收日期：20140211

5、动物饲养与管理

饲养环境：天津市新药安全评价研究中心实验动物屏障系统。温度：20～ 26℃，湿度：40～70％，光照：12小时明、12小时暗，通风：≥15次/小时全 新风，实验动物使用许可证号：SYXK(津)2011-0005。

动物食用SPF大小鼠饲料，批号：2013110、2014101、2014102，天津市华 荣实验动物科技有限公司提供，生产许可证号：SCXK(津)2012-0001。

动物饮用使用1T/h多重微孔滤膜过滤系统饮水机制备的过滤水。

动物管理由动物保障部负责，除禁食外，每天为动物提供足够的饲料和饮 用水。饮水瓶每天更换一次。动物饲养笼内垫料一般情况下根据动物生长情况 每日或隔日更换一次，特殊情况随时更换。饲养笼具每周更换一次，特殊情况 及时更换。

6、动物接收与检验

实验动物到来后，试验人员、兽医和动物保障部门一同接收。接收时首先 查看运输工具是否符合要求，再查看动物供应单位提供的动物合格证明，并确 认合格证内容与申请购买的动物种属、级别、数量和性别一致。然后检查外包 装是否符合要求及动物外包装是否有破损。动物外包装经第三传递柜传入检疫 室。试验用具和实验记录经第四传递柜传入。

在检疫室打开动物外包装，核对动物性别及数量与动物合格证明所载事项 是否一致。用记号笔在鼠尾标记动物检疫号，然后逐一对动物进行外表检查(包 括性别、体重、头部、躯干、尾部、四肢、皮毛、精神、活动等)，并填写《试 验动物接收单》和《动物接收检验单》。动物检验后放入动物饲养笼中，雌雄 分养，在笼具上悬挂检疫期标签，然后放在检疫室中进行适应期饲养。不合格 动物处死后经缓冲区移出放入尸体暂存冰柜中等待处理。

动物适应饲养期限为2天。分别在接收动物当日和适应饲养的最后一天对 动物进行全面检查，包括体重、头部、躯干、尾部、四肢、皮毛、精神、活动 等。其他时间的一般观察由动物保障部完成。适应期未发现异常动物。

7、试验方法与结果

7.1对小鼠热板试验的影响

试验选用ICR种雌性小鼠110只。分组前分别将小鼠置于HSS-1B型热板 实验恒温装置(水温设定为57.2℃)记录小鼠放上热板开始至出现舔后足动作 的时间，即小鼠疼痛潜伏期，作为小鼠的痛阈值，少于5秒、超过25秒的动物 予以剔除。挑选合格小鼠100只，随机分为10组，每组10只。按表3所示剂 量试验当天给药1次，对照组灌胃给予同体积去离子水。于试验前及给药后1h、 2h、3h和4h按上述方法测定小鼠疼痛潜伏期。将各给药组的平均疼痛潜伏期 与对照组平均疼痛潜伏期比较，进行统计学检验。结果(见表3)显示复方1和 单方镇痛作用基本相当，各组均能显著延长温热刺激致小鼠舔足反应的潜伏期， 镇痛作用持续到药后4h；复方2亦能显著延长温热刺激致小鼠舔足反应的潜伏 期，但镇痛作用仅能够持续到药后3h，且镇痛强度亦不如复方1和单方，结果 表明复方1和单方镇痛效果比复方2好且持久。

表3  对小鼠热板试验的影响(n＝10  )

与对照组比较*p＜0.05  **p＜0.01  ***p＜0.001

7.2.对小鼠醋酸扭体反应的影响

试验选用100只ICR种小鼠，体重20～22g，随机分为10组，每组10只， 雌雄各半。各组按表4试验当天ig给药1次，对照组灌胃给予同体积去离子水。 各组小鼠于给药后40分钟，腹腔注射0.7％的冰醋酸溶液0.2ml/只，用计数器记 录冰醋酸致痛后第二个10分钟内每只小鼠的扭体次数。取各给药组的平均扭体 数与对照组平均扭体数比较，进行统计学检验，结果(见表4)显示，单方及其 复方高、低剂量组均可非常显著地减少醋酸所致小鼠扭体次数，表明单方及其 复方对化学刺激引起的疼痛有明显的镇痛作用。

表4 对小鼠醋酸扭体反应的影响(n＝10)

与对照组比较*P＜0.05  **P＜0.01  ***p＜0.001

7.3.对甲醛刺激小鼠足跖试验的影响

试验选用ICR种小鼠100只，雌雄各半，体重18～20g。各组按表5所示剂 量试验当天ig给药1次，对照组灌胃给予同体积去离子水。于给药后1小时各 组小鼠右后足趾皮下注射5％甲醛溶液20μl，观察注射甲醛后10分钟内(I相， 观察中枢镇痛作用)及10～60分钟内(II相，观察外周镇痛作用)小鼠舔足、 抖足、抬足次数并计算分值。其中小鼠舔足、抖足、抬足分别为3分、2分和1 分。将各给药组小鼠的平均分值与对照组小鼠平均分值比较，进行统计学检验。 结果(见表5)显示，与对照组比较，单方和复方2高剂量组、复方1高、低剂 量组均可显著减少甲醛刺激致大鼠I相疼痛舔足、抖足、抬足次数；单方及其 复方高、低剂量组均可显著减少甲醛刺激致大鼠II相疼痛舔足、抖足、抬足次 数。表明单方及其复方对甲醛刺激引起的中枢及外周疼痛均有显著的镇痛作用， 但以复方1镇痛效果好且持久。

表5  对甲醛刺激小鼠足跖试验的影响(n＝10)

与对照组比较*p＜0.05  **p＜0.01  ***p＜0.001

7.4、对小鼠肿瘤(S180肉瘤)生长的抑制作用

按照文献方法进行。取接种肿瘤7～10天状态良好的荷瘤(腹水型)动物， 常规消毒后抽取少量腹水，推片瑞氏染色细胞分类证实肿瘤细胞数不少于75％ 后将腹水抽出，以腹水与生理盐水之比为1∶4比例稀释，制备成接种用的肿瘤 细胞混悬液。肿瘤细胞混悬液的制备均在无菌条件下(超净工作台中)完成。 吸取上述制备的肿瘤细胞混悬液0.2ml接种于小鼠右侧腋窝皮下，从取出肿瘤腹 水至肿瘤接种完毕在60分钟内完成。

肿瘤细胞接种后24小时动物随机分组，每组10只，雌性。按表6所示剂 量给药，除阳性药环磷酰胺1次腹腔注射外，其余各组每天ig给药1次，连续 7天，模型组给予同体积蒸馏水。末次给药后24小时，处死动物，称体重，解 剖并取出肿瘤组织，称取肿瘤重量，以平均瘤重及肿瘤生长抑制率来评价药物 的体内抗癌效果，计算公式为：肿瘤生长抑制率＝(1-T/C)×100％，式中T 为给药组平均瘤重，C为对照组平均瘤重。

上述抑瘤试验进行2次。结果由表6可见，2次抑瘤试验显示，单方及其复 方对S180肿瘤生长均未见抑制作用。

表6  对小鼠S₁₈₀(实体)肿瘤生长的抑制作用()

与模型组比较，***p＜0.001，**p＜0.01，*p＜0.05。

8、试验结论

不同样品在所含单方相同剂量下，①对甲醛刺激小鼠足跖试验中，单方及 其复方对甲醛刺激引起的中枢及外周疼痛均有显著的镇痛作用，但以复方1镇 痛效果好且持久；②在小鼠热板试验中，复方1和单方镇痛作用基本相当，各 组均能显著延长温热刺激致小鼠舔足反应的潜伏期，镇痛作用持续到药后4h； 复方2亦能显著延长温热刺激致小鼠舔足反应的潜伏期，但镇痛作用仅能够持 续到药后3h，且镇痛强度亦不如复方1和单方，表明复方1和单方镇痛效果比 复方2好且持久；③对小鼠醋酸扭体反应的试验中，单方及其复方高、低剂量 组均可非常显著地减少醋酸所致小鼠扭体次数，表明单方及其复方对化学刺激 引起的疼痛有明显的镇痛作用。④2次抑瘤试验显示，单方及其复方对S180肿 瘤生长均未见抑制作用。

筛选结果表明，单方及其2个复方均有显著的镇痛作用，比较而言复方1 对中枢及外周疼痛镇痛作用更为显著，镇痛效果更持久，且高、低剂量间有一 定的量效关系；单方及其2个复方均未见明显的抑瘤作用。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发 明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明 的保护范围之内。