加味二至汤治疗更年期代谢紊乱及性功能障碍的医疗用途

摘要

本发明涉及的是复方加味二至汤在治疗妇女更年期性功能障碍及糖脂代谢紊乱中的医疗用途。加味二至汤优选女贞子，墨旱莲。淫羊藿，山茱萸，生地黄，等比例搭配制成水煎剂服用。利用大鼠卵巢摘除模型模拟更年期，针对其性功能及血脂水平、糖耐量、胰岛素耐量、肝脏胰岛素敏感性等进行药效考察。并利用乳腺癌细胞系对本复方进行安全性评价。

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物领域，具体涉及加味二至汤治疗女性更年期血脂代谢紊 乱及性功能障碍的医疗用途。

背景技术

更年期综合症(Menopausal syndrome)是由卵巢功能丧失、激素缺乏引起的 一系列自主神经功能紊乱的现象。女性更年期除潮热、失眠、烦躁等症状外，常 伴有性功能减退及代谢紊乱现象，严重影响女性的生活质量和健康水平，寻找有 效手段预防及治疗极为重要。

代谢紊乱综合症(Metabolic syndrome，MS)是由于能量储存和利用的过程 发生紊乱而引发的病理状态。MS的病理表现包括中心性肥胖、血压升高、空腹 血糖升高、血浆甘油三酯升高以及高密度胆固醇酯水平上升，患者通常会同时出 现三个或以上的病理现象。MS严重影响患者的健康水平并诱发多种疾病，包括 心血管疾病(特别是心力衰竭)、糖尿病等。

一些大样本统计性试验显示MS在成年人中的发生与年龄的增长呈正相关 性，并且发现患有卵巢功能障碍疾病或处于围绝经期妇女中罹患MS的几率大大 升高(Heidari R，Sadeghi M，Talaei M，et al.Metabolic syndrome in menopausal  transition：Isfahan Healthy Heart Program，a population based study[J].Diabetol  Metab Syndr，2010，2：59.)，这可能与围绝经期妇女卵巢功能衰退、激素分泌不足 造成，并且在前期工作中以发现摘除卵巢的大鼠模型显示出多种MS的病理特征 (Bailey C J，Matty A J.Glucose tolerance and plasma insulin of the rat in relation to  the oestrous cycle and sex hormones[J].Hormone and Metabolic Research，1972， 4(04)：266-270.)。

根据中医理论对女性更年期症状“肝肾阴虚，阳失潜藏，抗逆于上”的认识， 对传统复方二至丸进行改良，增加淫羊藿、山茱萸、生地黄三味药物，以水煎煮 制成加味二至汤。

本发明公开了加味二至汤的女性更年期糖脂代谢紊乱的作用，即加味二至汤 可用于制备治疗女性更年期糖脂代谢紊乱的药物，且效果优异。所述的加味二至 汤优选女贞子、墨旱莲、生地黄、淫羊藿、山茱萸组成。

发明人在对加味二至汤的药理活性研究中发现，其提取物具有显著提高实验 动物的性功能指标；控制实验动物的体重，改善血脂指数、糖耐量，并缓解胰岛 素抵抗现象，而相较于传统的激素药物，对乳腺并无明显副作用。

发明内容

本发明公开了加味二至汤治疗女性更年期性功能障碍及血脂代谢紊乱的作用，即 加味二至汤可用于制备治疗女性更年期性功能障碍及血脂代谢紊乱的药物，且效 果优异。所述的加味二至汤优选女贞子、墨旱莲、生地黄、淫羊藿、山茱萸。 发明人在对加味二至汤的药理活性研究中发现，加味二至汤具有显著地缓解激素 缺乏引起的性功能障碍及一系列糖脂代谢紊乱的现象。更重要的是加味二至汤并 不引起乳腺癌细胞的增殖，并无类似激素替代疗法中出现的副作用。

下面结合实施例对加味二至汤的缓解女性更年期性功能障碍及血脂代谢紊 乱进行进一步的阐述。

附图说明

图1加味二至汤对卵巢摘除动物模型LQ指数的影响。

图2加味二至汤对卵巢摘除动物模型ALA指数的影响。

图3加味二至汤对卵巢摘除动物模型阴道分泌物水平的影响。

图4加味二至汤对卵巢摘除动物模型进食量的影响。

图5加味二至汤对卵巢摘除动物模型体重的影响。

图6加味二至汤对卵巢摘除动物模型血清甘油三酯水平的影响。

图7加味二至汤对卵巢摘除动物模型血清低密度脂蛋白-胆固醇的影响。

图8加味二至汤对卵巢摘除动物模型血清高密度脂蛋白-胆固醇的影响。

图9加味二至汤对卵巢摘除动物模型糖耐量的影响。

图10加味二至汤对卵巢摘除动物模型胰岛素耐量的影响。。

图11加味二至汤对卵巢摘除动物模型肝脏胰岛素通路活性的影响。

图12加味二至汤处理24小时对人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖的影响。

图13加味二至汤处理48小时对人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖的影响。

具体实施方式

实施例1

卵巢摘除动物模型制备及给药处理

选择SPF级雌性SD大鼠，6只一组，设置对照组、模型组、给药雌二醇组、 给药加味二至汤低剂量组、给药加味二至汤高剂量组，于25℃、12小时白天/ 黑夜循环光照条件下饲养，每天更换食物、饮水，隔天更换垫料。待实验动物生 长至8周龄进行卵巢摘除手术，其中对照组进行假手术操作。术后第5周开始按 照组别设置进行给药处理，根据人体药物用量换算得到各组实验动物的给药量， 其中雌二醇为0.2mg/kg/d；所选女贞子、墨旱莲、淫羊藿、山茱萸、生地黄粉碎 后用水进行热回流提取，浓缩后获得加味二至汤，其给药剂量分别为4.5g/kg/d (给药低剂量)及9g/kg/d(给药高剂量)，连续给药4周后进行相关指标检测。

实施例2

加味二至汤对模型动物性功能障碍的改善

各组动物给要处理结束后通过LQ指数、ALA指数及阴道分泌物水平对各 组动物的性功能水平进行评价。其中LQ指数的测算方法为：(脊柱前凸次数/骑 跨次数)×100，图1显示模型组动物LQ指数较低，而雌激素或加味二至汤处理 后均可得到改善，且加味二至汤高剂量组效果明显；ALA指数为交配过程中脊 柱前凸程度的评分：0-3分；0分：无性交，不允许骑跨；1分：轻微脊柱前凸， 或者背扁平、尾巴歪斜；2分：中等脊柱前凸、尾巴歪斜、雄鼠下来后脊柱前凸 不能维持；3分：最大程度脊柱前凸、尾巴歪斜、背完全弯曲、骑跨结束后仍然 维持脊柱前凸姿势，图2显示加味二至汤高剂量组的评分显著高于模型组，且优 于雌二醇给药组。对阴道分泌物的检测采用电刺激法，即下腹部中线4cm的切 口，暴露盆腔神经阴道支-电刺激(10V，16Hz，0.8msec，60s)(目的：模拟性唤 起)，事先称重、干燥的棉签，刺激之前插在阴道远端，刺激之后立刻拿出来称 重，图3显示加味二至汤高剂量组可使刺激后的分泌水平增加，显著改善模型动 物的性功能。

实施例3

加味二至汤对模型动物体重的影响

卵巢功能丧失、雌激素分泌严重不足导致体内代谢紊乱现象发生，其中一个 主要的表现是由糖脂代谢紊乱导致的体重过快增加。自术后开始，每三天称量一 次各组实验动物的体重并进行记录，考虑体重的改变可能与进食量有关，我们同 时每日记录各组动物的进食量。

如图4所示：对比各组实验动物的进食量，给药期间各组动物的进食量并无 显著差异，说明体重的改变与进食量并无关系。

图5显示：进行卵巢摘除手术后的动物体重增加量明显高于对照组，而进行 药物处理后体重增加量有所下降，其中雌二醇组、加味二至汤高剂量组效果明显， 加味二至汤高剂量组对比模型组有显著差异。

实施例4

加味二至汤对模型动物血脂指数的影响

各组动物给药处理结束后，使用颈总动脉取血法采集血液并保留血清，使用 试剂盒对血清甘油三酯、血清低密度脂蛋白-胆固醇、血清高密度脂蛋白-胆固醇 进行检测。

如图6所示：卵巢摘除后血液中甘油三酯(TG)含量明显上升，与模型组 相比，雌二醇及加味二至汤处理后血清甘油三酯含均有所下降，其中雌二醇及加 味二至汤高剂量组对血清甘油三酯具有明显降低效果。

当体内血脂代谢异常时，低密度脂蛋白-胆固醇(Low density  lipoprotein-Cholesterol，LDL-c)的含量会随之升高，过多的LDL易沉积于血管 壁而造成动脉粥样硬化等病症，可能是造成围绝经期妇女发生心血管疾病的因素 之一。图7显示卵巢摘除后可导致血浆LDL水平异常升高，加味二至汤处理后 可明显降低LDL的水平使其恢复正常值，其作用具有剂量依赖性。

体内的高密度脂蛋白-胆固醇(High density lipoprotein-Cholesterol，HDL-c) 水平反映高密度脂蛋白(HDL)的量，HDL可运载胆固醇经肝脏代谢最终由肠 道排出体外，图8显示摘除卵巢后HDL-c水平显著下降，加味二至汤处理后可 使HDL水平回复到正常水平。

实施例5

加味二至汤对模型动物糖耐量、胰岛素耐量及胰岛素敏感性的影响

糖耐量以及胰岛素耐量反应机体维持血糖平衡能力及胰岛素敏感性，是糖脂 代谢平衡重要的评价指标，因此在各组动物给药处理结束后进行腹腔注射糖耐量 检测(IPGTT)以及胰岛素耐量检测(ITT)，即对实验动物进行腹腔葡萄糖或胰岛 素注射，采用断尾取血法在不同时间点取血检测血糖值。

图9中糖耐量检测结果显示缺乏雌激素的动物调节血糖平衡的能力明显下 降，加味二至汤给药处理后可明显加快血糖恢复正常水平的速度，即加味二至汤 可以改善激素缺乏引起的糖耐量下降。

图10显示缺乏雌激素的动物对胰岛素敏感度下降，加味二至汤处理后实验 动物的血糖水平相对模型组明显降；同时在对实验动物注射胰岛素后立即处并收 集肝脏，对肝脏中Akt蛋白磷酸化水平进行检测，如图11中显示加味二至汤处 理组在注射胰岛素后肝脏Akt蛋白磷酸化水平明显升高，加味二至汤缓解由激素 缺乏造成的胰岛素抵抗现象，提高了胰岛素敏感性。

实施例6

加味二至汤对乳腺癌细胞增殖的影响

在女性更年期综合征的治疗种常使用激素替代疗法，但有调查显示使用激素替代 疗法有增加乳腺癌患病的风险，因此所使用的缓解妇女更年期代谢综合症的药物 应避免产生类似的副作用。

利用人乳腺癌细胞株MCF-7研究加味二至汤对乳腺癌细胞是否有促增殖的作用。 MCF-7细胞培养至融合度为80％，更换无酚红培养基，并添加5％活性炭处理的胎 牛血清，继续培养24小时后加入10^-8M雌二醇或不同浓度的加味二至汤提取物共 孵24小时或48小时，使用MTT法检测细胞存活率。图12显示，药物处理24 小时后雌二醇明显促进MCF-7细胞增殖，而加味二至汤各浓度组并未对其产生影 响。图13显示药物处理48小时后雌二醇仍呈现促进细胞增殖的效果，而加味二 至汤可显著抑制细胞增殖，说明加味二至汤作为改善女性更年期性功能障碍、治 疗更年期综合症的药物具有一定的安全性。