一种托盘根对四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠的降糖方法

摘要

本发明涉及一种托盘根对四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠的降糖方法，该具体过程为：将托盘根洗净，烘干，切片，并粉碎过40目筛；用电子天平称取托盘根粉末50g置于3000ml烧杯中，加水至2000ml，放置电热套中煎煮，沸后50min取出药液，抽滤，用过滤后的药渣继续二次煎煮，如此反复煎煮5次；将抽滤所得的药液置于电热套中浓缩到200ml左右，最后定容至250ml；向体重为180～220g的糖尿病大鼠尾静脉注射40mg/kg用生理盐水配制的1.5％四氧嘧啶注射液；用1.35g/kg托盘根水煎剂对大鼠灌胃。本发明托盘根水煎剂对糖尿病大鼠具有良好的降糖作用。

说明书

技术领域

本发明涉及药剂实验领域，尤其涉及一种托盘根对四氧嘧啶诱导的糖 尿病大鼠的降糖方法。

背景技术

托盘(Rubus crataegiflolius Bunge)为蔷薇科(Rosaceae)悬钩子属 (Rubus)植物，又名牛迭肚，主要生长于东北、内蒙古、河北、山东等地。 其根可用于治疗肝炎、风湿性关节炎、痛风等。经民间秘方中药抗癌灵(主 要成分为托盘根提取物)的实验研究证明抗癌灵对S180，HepA，EAC均 有明显抗肿瘤活性。托盘根味苦、涩，性微寒，具有清热凉血、散结、止 痛、利尿、消肿之功效。许多具有降糖作用的中药，如：人参、黄芪、枸 杞等，其有效成分主要为多糖。

由于托盘根中的多糖成分有抗炎、抗衰老、抗肿瘤作用。托盘根体外 实验能非常显著抑制小鼠肝、心、脑、肾过氧化脂质的生成；体内实验已 显著抑制小鼠血浆、肝、脑过氧化脂质的生成。托盘根含有某些抗氧化物 质。

托盘根提取物可直接杀伤肿瘤细胞，对淋巴细胞转化有促进作用，机 理尚不明确，可能与下列因素有关：(1)肿瘤细胞与正常细胞膜结构的不同。 细胞膜是细胞外部信息传入的第一关口，细胞膜结构影响信息传递过程， 托盘根提取物与肿瘤细胞膜接触后可能抑制细胞生长信息传递；与淋巴细 胞接触后促进细胞生长信息传递。(2)肿瘤细胞与正常细胞内成分的不同。 细胞内成分的差异决定细胞生长的快慢，托盘根提取物作用于肿瘤细胞可 能抑制细胞生长，促进细胞分裂。(3)托盘根提取物作用于肿瘤细胞核内 可能抑制刺激细胞生长酶系的产物表达，而于淋巴细胞内则促进细胞生长 酶系产物的表达。

现有技术中托盘根对四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠的降糖方法还未出 现。

鉴于上述缺陷，本发明创作者经过长时间的研究和实践终于获得了本 创作。

发明内容

本发明的目的在于提供一种托盘根对四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠的降 糖方法，用以克服上述技术缺陷。

为实现上述目的，本发明提供一种托盘根对四氧嘧啶诱导的糖尿病大 鼠的降糖方法，该具体过程为：

步骤a，将托盘根洗净，置于干燥箱中60℃烘烤2d，烘干，切片，并 粉碎过40目筛；

用电子天平称取托盘根粉末50g置于3000ml烧杯中，加水至2000ml， 放置电热套中煎煮，沸后50min取出药液，抽滤，用过滤后的药渣继续二 次煎煮，如此反复煎煮5次；将抽滤所得的药液置于电热套中浓缩到200ml 左右，最后定容至250ml；

步骤b，向体重为180～220g的糖尿病大鼠尾静脉注射40mg/kg用生理 盐水配制的1.5％四氧嘧啶注射液：

步骤c，用1.35g/kg托盘根水煎剂对大鼠灌胃。

在上述步骤c中，每天下午3点左右向大鼠灌胃给药一次。

进一步，在上述步骤c中，每天下午3点左右向大鼠灌胃给药一次。

进一步，在上述步骤a中，切片厚度为0.5～1.0cm。

与现有技术相比较本发明的有益效果在于：本发明方法中，糖尿病大 鼠经托盘根治疗后，中剂量托盘根水煎剂具有良好的降糖作用，可缓解糖 尿病大鼠典型的“三多一少”症状，对所取脏器皆有修复作用，说明托盘 根水煎剂具有良好治疗糖尿病的效果。

具体实施方式

以下，对本发明上述的和另外的技术特征和优点作更详细的说明。

本发明托盘根对四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠的降糖方法，该具体过程 为：

步骤一，将托盘根洗净，置于干燥箱中60℃烘烤2d，烘干，切片厚度 为0.5～1.0cm，并粉碎过40目筛；

用电子天平称取托盘根粉末50g置于3000ml烧杯中，加水至2000ml， 放置电热套中煎煮，沸后50min取出药液，抽滤，用过滤后的药渣继续二 次煎煮，如此反复煎煮5次；将抽滤所得的药液置于电热套中浓缩到200ml 左右，最后定容至250ml；

步骤二，向体重为180～220g的糖尿病大鼠尾静脉注射40mg/kg用生理 盐水配制的1.5％四氧嘧啶注射液；

步骤三，用1.35g/kg托盘根水煎剂对大鼠灌胃。

下面通过实验进行验证：

采用的实验材料为：托盘根；健康的Wistar大鼠，雌雄各半，体重180～ 220g；盐酸二甲双胍；四氧嘧啶；一氧化氮(NO)试剂盒，丙二醛(MDA)试 剂盒，过氧化物歧化酶(SOD)试剂盒，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂 盒；葡萄糖测定试剂盒。

本发明采用的实验仪器包括：202-00A台式电热干燥箱；SHZ-DIII予 华牌循环水真空泵；LX-10手掌型离心机；DIRUI DR-7000D半自动生化 分析仪；大龙微量移液器lml，10ul，100ul；AK-1000A摇摆式中药粉碎 机；JD400-3b电子天平；98-1-B型电子调温电热套；TD25-WS多管架自 动平衡离心机；722可见分光光度计；XW-80A旋涡混合器；AWH-6-SA 电子天平。

本实验方法的具体过程为：

步骤a，选取动物模型；选取健康的Wistar大鼠80只，雌雄各半，体 重180～220g，适应性饲养2W，随机选取5只雌鼠，5只雄鼠作为空白对 照组，其余大鼠尾静脉注射四氧嘧啶建立糖尿病模型；

造模前剪尾采血测定大鼠空腹血糖(FBG)；

向各组大鼠中，尾静脉注射40mg/kg用生理盐水配制的1.5％四氧嘧啶 注射液，正常对照组同时注射2.67ml/kg生理盐水；

注射后第四天剪尾采血测定FBG，选取FBG大于15.00mmol/L的大 鼠40只作为实验组，用配伍随机分组法随机分为模型组、阳性对照组、中 剂量组、高剂量组，每组雌雄各5只，FBG未达标的动物剔除；

空白对照组、模型组灌胃13.5ml/kg的蒸馏水，阳性对照组灌胃 210mg/kg的盐酸二甲双胍水溶液，中、高剂量组分别灌胃1.35g/kg、2.70g/kg 托盘根水煎剂。

步骤b，体重称量；使用电子天平称量大鼠体重，从造模前一天开始， 每天称一次，共18d，并记录。

步骤c，药物提取；将托盘根洗净，置于干燥箱中60℃烘烤2d，烘干 后，切片(0.5～1.0cm)，并粉碎过40目筛；

用电子天平称取托盘根粉末50g置于3000ml烧杯中，加水至2000ml， 放置电热套中煎煮，沸后50min取出药液，抽滤，用过滤后的药渣继续二 次煎煮，如此反复煎煮5次；将抽滤所得的药液置于电热套中浓缩到200ml 左右，最后定容至250ml。

步骤d，标本采集；实验结束后，各组动物禁食不禁水12h，次日清晨 剪尾采血检测FBG水平，第二天将大鼠处死，腹主动脉采血，离心，取血 清后置于冰箱中冷冻(-80℃)，并摘取胸腺、脾脏、胰腺、肝、肾等脏器。

步骤e，指标测量；

步骤e1，脏器系数测量；

将所摘取的脏器于生理盐水中洗净，滤纸吸干，称质量，并计算胸腺、 脾脏、胰腺、肝、肾等脏器的系数；

步骤e2，FBG检测；

采用半自动生化分析仪检测，以mmol/L表示。

步骤e3，MDA、NO含量测定；

测定前准备，根据说明书配制所用试剂，配制好的试剂置于冰箱中冷 藏保存；取上述血清样本，测定前室温复溶，再次离心取上清液测定。采 用硫代巴比妥酸法和硝酸还原酶比色法，按照说明书所示的操作步骤，超 纯水调零，722可见分光光度计在波长532nm(MAD)、550nm(NO)处测 定各管的吸光度值，计算血清中MDA(以nmol/L表示)、NO(以μmol/L 表示)的含量。

步骤e4，SOD、GSH-Px含量测定；

测定前准备，根据说明书配制所用试剂，配制好的试剂置于冰箱中冷 藏保存。取上述血清样本，测定前室温复溶，再次离心取上清液测定。采 用黄嘌呤氧化酶法和化学比色法测定，按照说明书所示的操作步骤，超纯 水调零，722可见分光光度计在波长550nm(SOD)和412nm(GSH-Px)处测定 各管吸光度值，计算血清SOD(kU/L)和GSH-Px(以kU/L表示)的含 量。

步骤f，统计学处理；统计学数据以±s表示，多组间比较用方差分析， 两组均数间比较用q检验。

实验结果分析：

一般情况：

造模前：动物活泼，毛色光亮，饮食饮水正常，组间体重比较无差异 (P>0.05)；

造模后：动物萎靡，反应迟钝，毛色无光泽，食量、饮水量明显增加， 尿量明显增多(根据各组鼠笼中垫料的湿润程度)。体重与空白对照组及 与造模前自身对照明显减轻，有显著性差异(P<0.05)，治疗组与模型组 及治疗组间无显著性差异(P>0.05)。

用药后：治疗组和模型组动物精神状态，毛色亮度，饮食、饮水量逐 渐(13d)恢复正常，动物体重较造模后自身体重均有所增加，但均低于对照 组。

用药后组间比较：模型组与治疗组体重均明显低于空白对照组 (P<0.05)，治疗组体重较模型组差异性显著(P<0.05)，治疗组间无显 著性差异，见表1。

表1大鼠体重变化表(g)

注：^*P<0.05vs造模前，^*P<0.05vs造模后空白对照组，^#P<0.05vs用药后 空白对照组。

&P<0.05vs用药后模型组及造模后3.2FBG水平：

造模前：各组动物FBG水平均无差异显著性(P>0.05)。

造模后：模型组和治疗组与自身造模前FBG水平差异显著(P<0.05) 及与空白对照组有显著性差异(P<0.05)。治疗组与模型组和治疗组之间 无显著性差异(P>0.05)。

用药后：治疗组和模型组FBG较造模后自身比较均降低(P<0.05)， 但均高于对照组，其模型组与空白对照组有显著性差异(P<0.05)。

用药后组间比较：模型组和治疗组FBG均高于空白对照组，治疗组与 模型组差异显著(P<0.05)。其高剂量组与模型组差异极显著(P<0.01)，治疗 组与空白对照组差异不显著(P>0.05)。提示托盘根水煎剂有较好的降糖作 用，见表2。

表2大鼠FBG变化表(mmol/L)

注：^*P<0.05vs造模前，^*P<0.05vs造模后空白对照组，^#P<0.05vs治疗 后空白对照组，^&P<0.05vs用药后模型组，^@P<0.05vs造模后。

血清MDA、NO含量和SOD、GSH-Px含量：

模型组血清中NO、MDA含量均较空白对照组降低。其MDA阳性对 照组低于模型组且无显著性差异(P>0.05)，提示盐酸二甲双胍对MDA 含量影响不大，中、高剂量组含量均高于模型组，且高剂量组较模型组有 显著性差异(P<0.05)；而NO阳性对照组和中、高剂量组均高于模型组， 其中剂量组与模型组有显著性差异(P<0.05)。模型组血清中SOD、GSH-Px 含量较空白对照组升高。其SOD阳性对照组高于模型组且无显著性差异 (P>0.05)，提示盐酸二甲双胍对SOD影响不大，中、高剂量组均较模型 组含量低，且高剂量组较模型组有显著性差异(P<0.05)；而GSH-Px阳 性对照组和中、高剂量组含量均低于模型组，且中、高剂量组与模型组差 异极显著(P<0.01)。提示中、高剂量托盘根水煎剂具有较好的抗氧化作 用，见表3。

表3用药后血清MDA、NO含量与SOD、GSH-Px含量表

大鼠脏器系数：

胸腺系数在各组中无显著性差异(P>0.05)，但阳性对照组和中、高 剂量组均向正常方向恢复，提示盐酸二甲双胍和中、高剂量托盘根水煎剂 有修复大鼠胸腺功能的作用；脾脏系数在各组中无显著性差异(P>0.05)， 但阳性对照组和中、高剂量组均向正常方向恢复，提示盐酸二甲双胍和中、 高剂量托盘根水煎剂有修复大鼠脾脏功能的作用；胰腺系数在各组中无显 著性差异(P>0.05)，但中剂量组向正常方向恢复，提示中剂量托盘根水 煎剂对胰腺有修复作用；肝系数模型组和空白对照组有显著性差异 (P<0.05)，中、高剂量组均向正常方向恢复，提示中、高剂量托盘根水 煎剂对肝功能的恢复有一定的作用；肾系数模型组较空白对照组差异极著 性(P<0.01)，高剂量组较模型组差异显著(P<0.05)，且中、高剂量组 均向正常方向恢复，提示中、高剂量托盘根水煎剂有修复肾功能的作用。 见表4。

表4大鼠脏器系数

本发明实验中，模型组大鼠血清中MDA和NO含量较对照组明显降 低，而血清中SOD和GSH-Px含量较对照组明显升高，伴随着FBG水平 升高，说明糖尿病大鼠体内产生大量的脂质过氧化反应，胰岛结构和功能 受到损伤，导致血糖水平升高。应用托盘根水煎剂治疗后，托盘根中剂量 组大鼠血清中NO和高剂量组血清中MDA含量较模型组显著升高 (P<0.05)，而托盘根高剂量组血清SOD和中、高剂量组GSH-Px含量均 较模型组显著降低(P<0.05)，说明中、高剂量托盘根水煎剂均具有增强 机体抗氧化酶的活性，减轻糖尿病引发的脂质过氧化反应，进而减少体内 脂质过氧化产物的含量，发挥抗氧化作用。从大鼠FBG水平及体重等因素 分析，托盘根水煎剂治疗组动物空腹血糖水平低于模型组，动物体重较模 型组增加，提示托盘根水煎剂可通过增强机体的抗氧化作用，促进胰岛细 胞分泌功能恢复，发挥降血糖作用。根据脏器系数的结果分析，中、高剂 量托盘根水煎剂具有修复胸腺、脾脏、肝、肾等脏器的作用；而中剂量托 盘根水煎剂亦有修复胰腺的作用。

本发明实验结果显示，经托盘根治疗后，中、高剂量托盘根水煎剂具 有良好的降糖作用，可缓解糖尿病大鼠典型的“三多一少”症状，对所取 脏器皆有修复作用，说明托盘根水煎剂具有良好治疗糖尿病的效果。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，对发明而言仅仅是说明性的，而 非限制性的。本专业技术人员理解，在发明权利要求所限定的精神和范围 内可对其进行许多改变，修改，甚至等效，但都将落入本发明的保护范围 内。