罗替戈汀、其衍生物或罗替戈汀或其衍生物药用盐的组合物

摘要

本发明涉及一种组合物，包含罗替戈汀或其药用盐；至少一种聚丙交酯乙交酯（PLGA）；和至少一种脂肪酸，其中相对于组合物总重量，该至少一种脂肪酸的含量至少为0.5%。本发明所述组合物明显降低了突释现象。本发明还提供了一种对需要治疗的主体以有效剂量的本发明所述组合物给药来治疗帕金森氏症的方法。

说明书

本申请以申请号为CN201010576447.5（申请日2010年11月25日）的中国专利申 请为优先权。

技术领域

本发明涉及一种罗替戈汀、其衍生物、或罗替戈汀或其衍生物药用盐的组合物。

背景技术

罗替戈汀由于肝首过效应，其口服生物利用度很低（约1%-5%），所以不适合于口服。 目前，Schwarz Pharma AG公司研制的罗替戈汀透皮贴剂，商品名为是首个用 于治疗帕金森综合症的透皮贴剂，该透皮贴剂已在德国、英国、澳大利亚等国上市。但 是该产品在使用过程中可出现罗替戈汀结晶。为了解决该问题，采用冷链贮存和配送（温 度2～8℃），每次处方不超过1个月的措施，来避免出现结晶，但是这明显给患者的使用 增加了困难。

CN1762495A公开了一种微球制剂，包含罗替戈汀及可降解高分子辅料。CN1762495A 公开的罗替戈汀微球虽然能够达到长效缓释效果，但却存在突释问题。从其说明书附图 中的图17（体内试验，载药量8%）、图12（体内试验，载药量20%）、图20（体内试验， 载药量40%）可以看出，当载药量在20%及40%的时候，突释现象较明显。从图20（体 内试验，载药量40%）与图19（体外实验，载药量40%）可知，体外实验中罗替戈汀微 球1天的释放量与药物在体内实验中的突释有相关性，相同载药量时，体外实验中释放 量越高，药物在体内的突释高。

由于帕金森病是老年退行性疾病，随着患者年龄的增长而逐渐加重，所以在治疗中 其给药量也在逐渐增加。在治疗发展期帕金森病患者时，药物的日摄入量将有较大的增 加。所以在罗替戈汀微球治疗发展期帕金森病患者中，有效成分的载药量不应过低，否 则，为了达到与高载药量相同的治疗效果，在对患者给药时，注射低载药量微球的量过 大，会给患者造成疼痛。然而，如果载药量过大，在对患者给药时，药物突释，容易造 成药物过量。

发明内容

本发明提供了一种可明显降低药物突释的药物组合物，药物如罗替戈汀、其衍生物、 或罗替戈汀药用盐或其衍生物的药用盐。

该组合物包含：

罗替戈汀、罗替戈汀衍生物、罗替戈汀药用盐、或罗替戈汀衍生物药用盐；

至少一种聚丙交酯乙交酯（PLGA）；和

至少一种脂肪酸，其中所述至少一种脂肪酸的含量相对于组合物总重量至少约为 0.5%，例如为，约1-15%。

在一些实施方式中，所述组合物是以微球形式存在。例如，微球的粒径可以是在约 1-250微米，例如为10-200微米。

在一些实施方式中，所述化合物是罗替戈汀，或其药用盐。

在一些实施方式中，相对于组合物总重量，罗替戈汀或其药用盐的含量约为20-40%。 在一个实施例中，相对于组合物总重量，罗替戈汀或其药用盐的含量可约为25-35%， 25-30%，20-30%，20-35%，25-40%，30-35%，30-40%，或35-40%。在另一个实施例中， 相对于组合物总重量，罗替戈汀或其药用盐的含量可约为21%，22%，23%，24%，25%， 26%，28%，29%，30%，31%，32%，33%，34%，35%，36%，37%，38%，39%，或 40%。

在一些实施方式中，相对于组合物总重量，所述至少一种PLGA的含量约为45-79%。 所述至少一种PLGA中可含有二、三、四或五种不同类型的PLGA聚合物，其分子量和/ 或聚合比可不同。在一个实施例中，相对于组合物总重量，所述至少一种PLGA的含量 约为47.5-77.5%，50-77.5%，52.5-72.5%，55-72.5%，55-69%，57.5-72.5%，57.5-77.5%， 60-72.5%，60-70%，62.5-67.5%，45-50%，47.5-60%，或50-60%。在另一个实施例中， 相对于组合物总重量，所述至少一种PLGA的含量约为45%，47.5%，50%，52.5%，55%， 57.5%，60%，62.5%，65%，67.5%，70%，72.5%，75%，77.5%，78%，或79%。

在一些实施方式中，罗替戈汀药用盐，是罗替戈汀与无机酸或有机酸形成的盐。无 机酸可选自盐酸、硫酸、磷酸和硝酸；有机酸选自柠檬酸、延胡索酸、马来酸、乙酸、 苯甲酸、乳酸、甲磺酸、萘磺酸和对苯甲磺酸。例如，有机酸可以是酸性氨基酸，如谷 氨酸和天门冬氨酸。

在一些实施方式中，所述至少一种PLGA的分子量约为5000-100000道尔顿。例如， 所述至少一种PLGA的分子量可约为5500-99000道尔顿，6000-98000道尔顿，6500-97000 道尔顿，7000-96000道尔顿，7500-95000道尔顿，8000-94000道尔顿，8500-93000道尔 顿，9000-92000道尔顿，9500-91000道尔顿，10000-90000道尔顿，10500-89000道尔顿， 11000-88000道尔顿，10500-87000道尔顿，11000-86000道尔顿，11500-85000道尔顿， 12000-84000道尔顿，12500-83000道尔顿，13000-82000道尔顿，13500-81000道尔顿， 14000-80000道尔顿，14500-79000道尔顿，15000-78000道尔顿，15500-77000道尔顿， 16000-76000道尔顿，16500-75000道尔顿，17000-74000道尔顿，17500-73000道尔顿， 18000-72000道尔顿，18500-71000道尔顿，19000-70000道尔顿，19500-69000道尔顿， 20000-68000道尔顿，21000-67000道尔顿，22000-66000道尔顿，23000-65000道尔顿， 24000-64000道尔顿，25000-63000道尔顿，26000-62000道尔顿，27000-61000道尔顿， 28000-60000道尔顿，29000-60000道尔顿，30000-59000道尔顿，31000-58000道尔顿， 32000-57000道尔顿，33000-59000道尔顿，34000-58000道尔顿，35000-57000道尔顿， 36000-56000道尔顿，37000-55000道尔顿，38000-54000道尔顿，39000-53000道尔顿， 40000-52000道尔顿，41000-51000道尔顿，42000-50000道尔顿，42000-49000道尔顿， 43000-48000道尔顿，44000-47000道尔顿，或45000-46000道尔顿。

在一些实施方式中，所述至少一种PLGA中丙交酯和乙交酯的聚合比为95:5-5:95。 例如，丙交酯和乙交酯的聚合比可以是约90:10-10:90，85:15-15:85，80:20-20:80， 75:25-25:75，70:30-30:70，65:35-35:65，60:40-40:60，或55:45-45:55。再比如，丙交酯 和乙交酯的聚合比可以是约50:50。

在一些实施方式中，PLGA中丙交酯和乙交酯的聚合比为约75:25-25:75。

在一些实施方式中，所述至少一种脂肪酸选自碳原子数为8-24的脂肪酸。所述至少 一种脂肪酸可选自硬脂酸、软脂酸、油酸、癸酸、辛酸或木蜡酸。例如，所述至少一种 脂肪酸可为硬脂酸。

在一些实施方式中，相对于组合物总重量，所述至少一种脂肪酸的含量至少为0.5%。 例如，所述至少一种脂肪酸的含量可以是约1-15%，2-15%，3-15%，4-15%，5-15%，6-15%， 7-15%，8-15%，9-15%，10-15%，11-15%，12-15%，13-15%，14-15%，1-12.5%，2-12.5%， 3-12.5%，4-12.5%，5-12.5%，6-12.5%，7-12.5%，8-12.5%，9-12.5%，10-12.5%，11-12.5%， 1-10%，2-10%，3-10%，4-10%，5-10%，6-10%，7-10%，8-10%，9-10%，1-7.5%，2-7.5%， 3-7.5%，4-7.5%，5-7.5%，6-7.5%，1-5%，2-5%，3-5%，4-5%，1-3%，2-3%，2-4%， 3-4%。在另一个实施例中，所述至少一种脂肪酸的含量可约为1%，1.5%，2%，2.5%， 3%，3.5%，4%，4.5%，5%，5.5%，6%，6.5%，7%，7.5%，8%，8.5%，9%，10%，10.5%， 11%，11.5%，12%，12.5%，13%，13.5%，14%，14.5%，或15%。

在一些实施方式中，相对于组合物总重量，罗替戈汀或其药用盐含量约为20-40%， 所述至少一种PLGA的重量含量约为57.5-72.5%，所述至少一种脂肪酸重量含量约为 2.5%-7.5%。

在一些实施方式中，相对于组合物总重量，罗替戈汀或其药用盐重量含量约为 20-40%，所述至少一种PLGA的重量含量约为57.5%-77.5%，所述至少一种脂肪酸重量 含量约为2.5%。

在一些实施方式中，相对于组合物总重量，罗替戈汀或其药用盐重量含量约为30%， 所述至少一种PLGA的重量含量约为55.5%-69%，所述至少一种脂肪酸重量含量约为 1-15%。

在一些实施方式中，相对于组合物总重量，罗替戈汀或其药用盐重量含量约为30%， 所述至少一种PLGA的重量含量约为62.5%-67.5%，所述至少一种脂肪酸重量含量约为 2.5-7.5%。

在一些实施方式中，相对于组合物总重量，罗替戈汀或其药用盐重量含量约为30%， 所述至少一种PLGA的重量含量约为67.5%，脂肪酸重量含量约为2.5%。

在一些实施方式中，所述至少一种PLGA中含有第一种PLGA和第二种PLGA，其 中第一种PLGA的分子量约为42000-75000道尔顿，第二种PLGA的分子量约为 15000-35000道尔顿，第一种PLGA和第二种PLGA的重量比约为95:5-5:95。

在一些实施方式中，第一种PLGA的分子量约为15000-30000道尔顿，15000-25000 道尔顿，15000-20000道尔顿，20000-35000道尔顿，20000-30000道尔顿，20000-25000 道尔顿，25000-35000道尔顿，25000-30000道尔顿，或30000-35000道尔顿。

在一些实施方式中，第二种PLGA的分子量约为45000-70000道尔顿，50000-65000 道尔顿，55000-60000道尔顿，45000-65000道尔顿，45000-60000道尔顿，45000-55000 道尔顿，45000-50000道尔顿，50000-70000道尔顿，50000-55000道尔顿，60000-65000 道尔顿，60000-70000道尔顿，45000-75000道尔顿，50000-75000道尔顿，55000-75000 道尔顿，60000-75000道尔顿，65000-75000道尔顿，或70000-75000道尔顿。

在一些实施方式中，第一种PLGA和第二种PLGA的重量比可约为90:10-10:90， 85:15-15:85，80:20-20:80，75:25-25:75，70:30-30:70，65:35-35:65，60:40-40:60，或 55:45-45:55。

在一些实施方式中，第一种PLGA选自PLGA（75254A）和PLGA（75255A），第 二种PLGA是PLGA（50502.5A）。

在一些实施方式中，第一种PLGA和第二种PLGA的重量比约为50:50。

在一些实施方式中，相对于组合物总重量，罗替戈汀或其药用盐含量约为20-40%， 第一种PLGA和第二种PLGA的含量约为57.5-72.5%，脂肪酸重量含量约为2.5%-7.5%。

在一些实施方式中，相对于组合物总重量，罗替戈汀或其药用盐含量约为20-40%， 第一种PLGA和第二种PLGA的含量约为57.5-77.5%，脂肪酸重量含量约为2.5%。

在一些实施方式中，相对于组合物总重量，罗替戈汀或其药用盐含量约为30%，第 一种PLGA和第二种PLGA的含量约为55-69%，脂肪酸重量含量约为1-15%。

在一些实施方式中，相对于组合物总重量，罗替戈汀或其药用盐含量约为30%，第 一种PLGA和第二种PLGA的含量约为62.5-67.5%，脂肪酸重量含量约为2.5-7.5%。

在一些实施方式中，相对于组合物总重量，罗替戈汀或其药用盐含量约为30%，第 一种PLGA和第二种PLGA的含量约为67.5%，脂肪酸重量含量约为2.5%。

本发明所述组合物中可提供一种化合物（如罗替戈汀）或其药用盐的长效缓释，例 如，一种微球制剂，包含罗替戈汀或其药用盐，PLGA，和脂肪酸，该微球具有减少的突 释现象，具有非常好的批间一致性，并且解决了微球在给药后1-4天释药量低的问题。 且动物体内血药浓度个体差异可明显降低。

本发明所述组合物可降低突释效果，尤其是相对于组合物总重量，化合物（如罗替 戈汀）或其药用盐的含量大于20%时。化合物（如罗替戈汀）或其药用盐相对于组合物 总重量的重量百分比在此也称为“载药量”。

本发明所述组合物可长期稳定释药，且没有明显的突释现象，因此实现了长效缓释 的目的。

本发明中所述PLGA又称聚丙交酯乙交酯，英文名称为Poly（lactide-co-glycolide）， 其为丙交酯/乙交酯共聚物，其中乙交酯和丙交酯的聚合比可以是任意适当的比例，例如， 丙交酯和乙交酯的聚合比可约为95:5-5:95，例如约75:25-25:75。

PLGA结构可如下:

其中，n为0或正整数，m为0或正整数，但n和m不同时为0。本发明中所述PLGA 可以被进一步化学修饰。

本发明所述的微球是指：由药物均匀溶解和/或分散在聚合物基质中组成的骨架型微 球。

本发明所述微球粒径范围约1-250微米，例如为，10-240微米，20-230微米，40-210 微米，50-200微米，60-190微米，70-180微米，80-170微米，90-160微米，100-150微 米，110-140微米，或120-130微米。例如，如本发明所述微球粒径约为10，20，30，40， 50，60，70，80，90，100，110，120，130，140，150，160，170，180，190，200，210， 220，230，240，或250微米。

本发明所述的微球可以采用本领域微球的常规制备方法制得，如采用喷雾干燥法、 溶剂挥发法以及喷雾萃取法，但并不受限于本发明列举的方法。

当用溶剂挥发法制备本发明的微球时，首先用有机溶剂把化合物（如罗替戈汀）或 其药用盐和PLGA及脂肪酸溶解，配制成有机相。另外，用水溶性的药用高分子辅料配 制连续水相，将有机相通过细管注入到连续水相中，在机械搅拌或者超声波的剧烈搅拌 作用下，充分乳化以形成微球，然后挥发干有机溶剂，过滤分离所形成的微球，干燥即 得。在必要的情况下，也可以按照常规方法对微球进行水洗、分级等后处理，进行减压 烘干或者冻干等干燥处理，然后分装。

以上操作中，有机溶剂可为具有足够挥发性、低残留的低沸点有机溶剂，例如二氯甲 烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、以及其任意组合。配制连续水相的水溶性的药用高分子辅 料可以为聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠、聚乙烯基吡咯烷酮、聚甲基丙烯酸钠和聚丙烯酸 钠的一种、两种或两种以上组合，但不仅限于此。

在配制有机相的时候，化合物（如罗替戈汀）或其药用盐和PLGA及脂肪酸在有机 溶剂中的含量只要有机溶剂能够溶解，就没有限制。例如PLGA和脂肪酸在有机溶剂中 的浓度可约为1-30%（w/v），例如为约5-25%或10-20%。

在用聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠、聚乙烯基吡咯烷酮、聚甲基丙烯酸钠和聚丙烯酸 钠中的一种、两种或两种以上组合配制连续水相时，对于这些聚合物辅料的浓度没有特 别限制，但根据其在水中的溶解度，在水相中的含量可以为例如0.01-12.0%（w/v），例 如0.01-10.0%（w/v），例如0.1-5%（w/v）。

在将有机相注入水相并剧烈搅拌以形成微球时，水相和有机相的体积比应足以使有 机相在水相中充分分散以形成足够细的粒度和均匀度的微球，但是如果水相过多，后处 理可能复杂，成本提高。例如，有机相与水相的体积比可为约1:4-1:100，例如约1:5，1:10， 1:20，1:30，1:40，1:50，1:60，1:70，1:80，1:90，或1:100。

也可以采用喷雾干燥法制备微球。例如，以有机溶剂把化合物（如罗替戈汀）或其 药用盐和PLGA及其它辅料充分溶解配制成有机溶液；将有机溶剂过滤，以常规喷雾干 燥法制成微球。在必要的情况下，也可以按照常规方法对微球进行水洗，分级等后处理， 然后分装。

上述喷雾干燥法制备微球时，有机溶剂可以使用二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧 六环、乙醚、丙酮、四氢呋喃、冰醋酸及其任意组合，但不仅限于此。

在配制有机相的时候，PLGA在有机溶剂中的含量，只要有机溶剂能够溶解该辅料 就没有限制。例如，PLGA浓度可为约1-30%（w/v），例如为约5-25%（w/v）或10-20% （w/v）。

也可以采用喷雾萃取法制备微球，当采用喷雾萃取法制备微球时，以“有机溶剂A” （可以溶解化合物（如罗替戈汀）或其药用盐，PLGA和脂肪酸）将化合物（如罗替戈 汀）或其药用盐和PLGA及其它辅料充分溶解配制成有机溶液，将其喷雾至“有机溶剂 B”（罗替戈汀或其药用盐，PLGA和脂肪酸在其中溶解度有限）或水中，经萃取而制成 微球。在必要的情况下，也可按照常规方法对微球进行水洗，分级等的后处理，然后分 装。

上述“有机溶剂A”可选自二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧六环、乙醚、丙酮、 四氢呋喃、苯、甲苯、和冰醋酸中的一种或几种。所述的“有机溶剂B”可选自甲醇、 乙醇、丙醇、异丙醇、石油醚、烷烃、和石蜡油中的一种或几种。

在配制有机溶液时，PLGA在“有机溶剂A”中的含量，只要“有机溶剂A”能溶 解该辅料，就没有限制。例如，浓度可为约1-30%（w/v），例如为约5-25%（w/v）或10-20% （w/v）。

从制成的微球的粒径均匀度和操作简便性等来说，与溶剂挥发法和喷雾萃取法相比， 优选喷雾干燥法。然而，从降低初始释放的角度来说，可优选溶剂挥发法。

本发明所述微球制备后，经过粒径分级或者如果粒径足够均匀的话也可以不分级， 清洗、干燥后按照规定剂量分装，可以制成粉针剂注射剂。

本发明还提供了一种用所述组合物制备的粉针注射剂。该粉针注射剂可在使用时在 现场（in situ）配成注射剂。粉针剂可以是直接由上述组合物（如本发明所述微球）制成， 使用前用羧甲基纤维素钠注射液将微球混悬均匀。粉针剂也可以是在组合物（如本发明 所述微球）中混配适当量的羧甲基纤维素钠、甘露醇、葡萄糖等来制成，使用前在其中 加入适当量的注射用纯水，制成注射液。

本发明还提供了一种采用给予需要治疗的主体有效剂量的上述本发明的组合物来治 疗与多巴胺受体有关的疾病和/或治疗帕金森氏症的方法。例如，治疗方法可以是用一种 组合物给药，相对于组合物总重量，含有约20-35%的罗替戈汀或其药用盐，约2.5-10% 的至少一种脂肪酸，约55-77.5%的至少一种PLGA，其中该组合物是以微球形式存在。 在另一个实施例中，治疗方法是用一种组合物给药，相对于组合物总重量，其中含有约 30%的罗替戈汀或其药用盐，约2.5%的至少一种脂肪酸，约67.5%的至少一种PLGA， 如本发明中所述的由第一种PLA和第二种PLGA组成的PLGA，其中该组合物是以微球 形式存在。

本发明所述组合物可以对有需要的主体以非肠道形式给药。例如，该组合物可以以 肌肉注射、皮下注射、皮内注射、腹内注射等形式给药。从给药方便角度来说，所述组 合物优选肌肉注射给药或皮下注射给药。

本发明所述组合物可实现至少约两周的给药间隔，如约三周、四周、五周等。

附图说明

图1实施例1的含单一PLGA的微球（理论载药量20%）体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图2实施例2的含单一PLGA的微球（理论载药量25%）体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图3实施例3的含单一PLGA的微球（理论载药量30%）体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图4实施例4的含单一PLGA的微球（理论载药量35%）体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图5实施例5的含单一PLGA的微球（理论载药量40%）体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图6实施例3和实施例8的微球的体内浓度曲线

◆表示实施例3微球（PLGA75254A）体内释放药时曲线

▲表示实施例8微球（含2.5%硬脂酸和PLGA75254A）体内释放药时曲线

图7实施例6的含单一PLGA和硬脂酸的微球（理论载药量20%）体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图8实施例7的含单一PLGA和硬脂酸的微球（理论载药量25%）体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图9实施例8的含单一PLGA和硬脂酸的微球（理论载药量30%）体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图10实施例9的含单一PLGA和硬脂酸的微球（理论载药量35%）体外释放效果 图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图11实施例10的含单一PLGA和硬脂酸的微球（理论载药量40%）体外释放效果 图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图12实施例11的含2.5%辛酸（C8）的微球体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图13实施例12的含2.5%木蜡酸（C24）微球体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图14实施例13的含0.5%硬脂酸的微球体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图15实施例14的含1%硬脂酸的微球体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图16实施例15的含5%硬脂酸的微球体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图17实施例16的含10%硬脂酸的微球体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图18实施例17的含15%硬脂酸的微球体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图19含PLGA50502.5A的微球体内药时曲线

图20实施例18的含两种不同分子量PLGA（75254A:50502.5A=95:5）的微球体外 释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图21实施例19的含两种不同分子量PLGA（75254A:50502.5A=50:50）的微球体 外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图22实施例20的含两种不同分子量PLGA（75254A:50502.5A=5:95）的微球体外 释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图23实施例21的含硬脂酸（1%）和两种不同分子量PLGA（75254A:5050 2.5A=50:50）的微球体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图24实施例22的含硬脂酸（2.5%）和两种不同分子量PLGA（75254A:5050 2.5A=50:50）的微球体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图25实施例23的含硬脂酸（7.5%）和两种不同分子量PLGA（75254A:5050 2.5A=50:50）的微球体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图26实施例24的含硬脂酸（10%）和两种不同分子量PLGA（75254A:5050 2.5A=50:50）的微球体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图27实施例25的含辛酸（2.5%）和两种不同分子量PLGA（75254A:5050 2.5A=50:50）的微球体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图28实施例26的含木蜡酸（2.5%）和两种不同分子量PLGA（75254A:5050 2.5A=50:50）的微球体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图29实施例27的含硬脂酸（2.5%）和两种不同分子量PLGA（75254A:5050 2.5A=95:5）的微球体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图30实施例28的含硬脂酸（2.5%）和两种不同分子量PLGA（75254A:5050 2.5A=5:95）的微球体外释放效果图

△表示每天释放量  ■表示累计释放量

图31含硬脂酸（2.5%）且两种不同分子量PLGA按不同重量比例组合的微球体内 药时曲线

◆表示75254A:50502.5A=50:50（2.5%硬脂酸）微球体内药时曲线

▲表示75254A:50502.5A=70:30（2.5%硬脂酸）微球体内药时曲线

—表示75254A:50502.5A=80:20（2.5%硬脂酸）微球体内药时曲线

■表示75254A:50502.5A=90:10（2.5%硬脂酸）微球体内药时曲线

图32实施例22罗替戈汀微球体外体内相关性图

图33按实施例3制备的5批微球体外释放效果图

图34按实施例8制备的5批微球体外释放效果图

图35按实施例14制备的5批微球体外释放效果图

图36按实施例16制备的5批微球体外释放效果图

图37按实施例11制备的5批微球体外释放效果图

图38按实施例12制备的5批微球体外释放效果图

具体实施方式

以下通过非限制性实施例来进一步说明本发明。

实施例1单一PLGA制备微球（理论载药量20%）

称取罗替戈汀0.3104g和PLGA75254A1.2083g，加二氯甲烷7.5ml搅拌溶解，在搅 拌（1200-2000rpm）下用蠕动泵（100rpm）加入至750ml0.5%PVA水溶液中，乳化2min 后，降低搅拌速度挥发溶剂5h，将所得溶液经1200目筛过滤收集微球，并以纯化水冲 洗1200目筛上微球3～5遍后，冻干，经100目筛过筛后，即得最终的微球。

实施例2单一PLGA制备微球（理论载药量25%）

称取罗替戈汀0.3752g和PLGA75254A1.1291g，按实施例1的方法制备，即得罗替 戈汀微球。

实施例3单一PLGA制备微球（理论载药量30%）

称取罗替戈汀0.4522g和PLGA75254A1.0511g，按实施例1的方法制备，即得罗替 戈汀微球。

实施例4单一PLGA制备微球（理论载药量35%）

称取罗替戈汀0.5268g和PLGA75254A0.9790g，按实施例1的方法制备，即得罗替 戈汀微球。

实施例5单一PLGA制备微球（理论载药量40%）

称取罗替戈汀0.6043g和PLGA75254A0.9019g，按实施例1的方法制备，即得罗替 戈汀微球。

试验例1

取实施例1-5微球，通过模拟体内条件进行体外释放试验。

试验条件:温度:37±0.5℃，转速:50rpm

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基键合硅胶为填充剂，以0.3%磷酸水溶液 （取3mL磷酸，用水稀释至1000mL）-乙腈（66:34）为流动相；柱温为35℃，检测波 长为223nm，罗替戈汀峰与其他峰的分离度应符合规定。理论塔板数按罗替戈汀峰计算 不低于10000。

试验方法：照释放度测定法（《中国药典》2005年版二部附录X D）测定。分别精密 称定上述微球各3份，每份约6mg，分别置于10mL具塞离心管中，加入含0.2%SDS释 放介质磷酸盐缓冲液9.0mL，振摇至混悬后，放入37℃±0.5℃的水浴振荡器中，以50±3rpm 的速度振荡，分别于3h、1d、2d、4d、6d、8d、10d、12d、14d、16d、18d、20d取出离 心管，在5-8℃下，以3600rpm的转速离心10min。待离心结束后，取上清液6mL作为 供试液，同时补充相同温度的释放介质6.0mL，振摇至混悬后放回水浴振荡器中振荡， 取上述供试液用HPLC测定，按外标法计算累积释放量，在pH7.4的条件下，体外释药 数据见表1，体外释药曲线见附图1-5。

表1不同理论载药量考察结果

罗替戈汀微球0.125和1天的释放量与药物在体内的突释有一定的相关性，体外释 放量高，药物在体内的突释高。

由表1和图1-5可以看出，随着微球的载药量从20%增加至40%，罗替戈汀0.125 天的释放量从1.33%增加至4.97%，1天的累积释放量从5.24%增加至20.45%，即微球在 0.125天和1天两个时间点的药物释放明显增加。表1显示随着载药量的增加，罗替戈汀 微球的体内突释将会增加。

试验例2罗替戈汀微球的体内释放试验

样品：实施例3微球

血浆样品处理：加入100μl内标溶液（500ng/mL地西泮），100μl乙腈:水（75:25）， 100μl 1M Na₂CO₃，涡流混合2min，加入3ml提取剂（正己烷:二氯甲烷:异丙醇＝2:1:0.1）， 涡流10min，离心10min（3600rmin^-1），取上层有机相于另一试管中，压缩空气流下35℃ 吹干，加入100μl乙腈:水（1mM醋酸铵）（75:25）复溶。进样10μl，记录色谱图。

色谱条件：

流动相（A）：（1mM NH4Ac）水（B）：乙腈；梯度洗脱0-0.8min：B70-90%，0.8-3.5min： B90-90%，3.5-3.6min：B90-70%，3.6-7.5min：B70-70%；流速：0.35ml/min；柱温：35℃； 进样量：10μl。

质谱条件：

离子源：离子喷雾离子化源；离子喷射电压：5500V；温度：500℃；GS1：50psi； GS2：50psi；气帘气（CUR）压力：15psi；碰撞气（CAD）压力：8psi；正离子方式检 测；扫描方式为多反应监测（MRM）；罗替戈汀及地西泮的DP电压分别是50和88V， CE分别为36V和47V，CXP均为10V，用于定量分析的离子反应分别是316.2/147.1（罗 替戈汀）和256.1/167.1（地西泮）。

工作曲线的制备

取空白血浆0.2ml，加入罗替戈汀标准系列溶液100μl，内标（500ng/mL地西泮）100μl， 制备成相当于血浆浓度为0.05，0.25，1.00，2.50，5.00，12.5ng/mL的样品，血浆样品 按《中国药典》2005年版二部中的“血浆样品分析法”操作，建立标准曲线；以待测物 浓度为横坐标，待测物与内标物的峰面积比值为纵坐标，用加权（w＝1/x²）最小二乘法 进行回归运算，求得的直线回归方程为标准曲线。

试验方法：

健康beagle犬3只，一雌两雄，体重9-11kg，自由进食，自由饮水。取微球以罗替 戈汀5.5mg/kg的剂量经犬肌肉注射给药，于给药后按0h和1h，3h，6h，24h，48h，96h， 144h，192h，240h，288h，336h，384h，432h，480h经犬前肢静脉取血3mL，置肝素化 试管中，6000rpm离心10min，分离血浆，-20°C保存，按上述分析方法进行测定，体 内释放见图6。表1数据表明，实施例3制备的微球，在0.125天和1天的累积释放量分 别为2.00%和9.53%。从图6可以看出，该微球在犬体内先有一个明显的突释，然后血药 浓度下降，96小时后，血药浓度增加，至192小时达到C_max。0.125天和1天的血药浓 度明显高于C_max，说明由实施例3制备的微球存在明显的突释现象。

实施例6单一PLGA+硬脂酸制备微球（理论载药量20%）

称取罗替戈汀0.3104g和PLGA75254A1.1603g，硬脂酸0.0370g，按实施例1的方 法制备，即得罗替戈汀微球。

实施例7单一PLGA+硬脂酸制备微球（理论载药量25%）

称取罗替戈汀0.3712g和PLGA75254A1.0891g，硬脂酸0.0379g，按实施例1的方 法制备，即得罗替戈汀微球。

实施例8单一PLGA+硬脂酸制备微球（理论载药量30%）

称取罗替戈汀0.4522g和PLGA75254A1.0136g，硬脂酸0.0371g，按实施例1的方 法制备，即得罗替戈汀微球。

实施例9单一PLGA+硬脂酸制备微球（理论载药量35%）

称取罗替戈汀0.5258g和PLGA75254A0.9790g，硬脂酸0.0374g，按实施例1的方 法制备，即得罗替戈汀微球。

实施例10单一PLGA+硬脂酸制备微球（理论载药量40%）

称取罗替戈汀0.6083g和PLGA75254A0.8619g，硬脂酸0.0367g，按实施例1的方 法制备，即得罗替戈汀微球。

试验例3

取实施例6-10微球，按试验例1方法进行体外释放试验。体外释药数据见表2，体 外释药曲线见附图7-11。

表2含硬脂酸的不同理论载药量考察结果

将表2数据和表1数据进行比较，加入硬脂酸后，载药量为20%-40%罗替戈汀微球， 0.125天的释放量从1.33%-4.97%降为0.51%-3.58%，1天的累积释放量从5.24%-20.45% 降为2.84%-10.29%，提示加入硬脂酸可以有效地降低突释效应。

试验例4罗替戈汀微球的体内释放试验

样品：实施例8微球

按试验例2方法进行体内药动学试验。释放结果见图6。从图6可以看出，加入硬 脂酸后降低了突释效应，但同时1-4天的释药量低。

实施例11含辛酸且单一PLGA制备微球

称取罗替戈汀0.4520g，PLGA75254A1.0119g和辛酸0.0371g（2.5%），按实施例1 的方法制备，即得罗替戈汀微球。

实施例12含木蜡酸且单一PLGA制备微球

称取罗替戈汀0.4489g，PLGA75254A1.0130g和木蜡酸0.0373g（2.5%），按实施例 1的方法制备，即得罗替戈汀微球。

试验例5加入含不同碳原子数脂肪酸对罗替戈汀微球释药的影响

取实施例11-12微球，按试验例1方法进行体外释放试验。体外释放数据见表3，体 外释放曲线见图12-13。

表3含不同碳原子数脂肪酸罗替戈汀微球考察结果

表3数据和表1（30%载药量）数据进行比较。相比于没有脂肪酸的罗替戈汀微球， 罗替戈汀微球中加入碳原子数为8的辛酸和碳原子数为24的木蜡酸后，在0.125天的释 放量和1天的累积释放量分别从2.00%和9.53%降为1.01%-1.14%和2.84%-4.02%，说明 均可有效降低突释。由表2（碳原子数为18的硬脂酸）和表3结果可知碳原子数在8-24 的脂肪酸均可有效降低突释。

实施例13含0.5%硬脂酸和单一PLGA的微球

称取罗替戈汀0.4528g，PLGA75254A1.0432g和硬脂酸0.0078g（0.5%），按实施例 1的方法制备，即得罗替戈汀微球。

实施例14含1%硬脂酸和单一PLGA的微球

称取罗替戈汀0.4528g，PLGA75254A1.0362g和硬脂酸0.0158g（1%），按实施例1 的方法制备，即得罗替戈汀微球。

实施例15含5%硬脂酸和单一PLGA的微球

称取罗替戈汀0.4528g，PLGA75254A0.9751g和硬脂酸0.0758g（5%），按实施例1 的方法制备，即得罗替戈汀微球。

实施例16含10%硬脂酸和单一PLGA的微球

称取罗替戈汀0.4492g，PLGA75254A0.9028g和硬脂酸0.1532g（10%），按实施例 1的方法制备，即得罗替戈汀微球。

实施例17含15%硬脂酸和单一PLGA的微球

称取罗替戈汀0.4528g，PLGA75254A0.8261g和硬脂酸0.2258g（15%），按实施例 1的方法制备，即得罗替戈汀微球。

试验例6

取实施例13-17微球，按试验例1方法进行体外释放试验。

体外释药结果见表4，图14-18。

表4含不同含量硬脂酸的罗替戈汀微球考察结果

比较表4和表1结果，可以看出，硬脂酸含量为0.5%时，罗替戈汀在0.125天的释 放量和1天的累积释放量为1.91%和10.96%，与不含硬脂酸的实施例3微球比较无明显 变化，说明加入的硬脂酸的量小于或等于0.5%时无明显降低突释效果；当硬脂酸含量大 于0.5%，如为1-15%时，罗替戈汀0.125天的释放量和1天的累积释放量降低为 0.75%-1.26%之间和1.90%-5.70%之间，可有效降低药物的突释。表4数据和图14-18还 显示，随着硬脂酸含量的增加，药物的释放随之延缓。

试验例7PLGA50502.5A制备微球体内试验

按实施例3的方法，用PLGA50502.5A替换实施例3中的PLGA75254A其它条件 不变，制备微球，体内试验方法同试验例2方法，结果见图19。

由图19可以看出，PLGA50502.5A微球前期释药速度较快，释药周期较短。

实施例18两种不同分子量PLGA组合（95:5）的罗替戈汀微球

称取罗替戈汀0.4504g和PLGA75254A0.9973g，PLGA50502.5A0.0521g（重量比 95:5），按实施例1的方法制备，即得罗替戈汀微球。

实施例19两种不同分子量PLGA组合（50:50）的罗替戈汀微球

称取罗替戈汀0.4489g和PLGA75254A0.5261g，PLGA50502.5A0.5256g（重量比 50:50），按实施例1的方法制备，即得罗替戈汀微球。

实施例20两种不同分子量PLGA组合（5:95）的罗替戈汀微球

称取罗替戈汀0.4508g和PLGA75254A0.0519g，PLGA50502.5A0.9968g（重量比 5:95），按实施例1的方法制备，即得罗替戈汀微球。

试验例8不同重量比高分子组合对微球释药的影响

取实施例18-20微球，按试验例1方法进行体外释放试验。体外释药结果见表5，图 20-22。

表5两种不同分子量PLGA组合制备微球体外释药数据

由表5和图20-22可以看出，当微球内PLGA50502.5A含量从5%增加到95%时， 微球1-4天的释药量增加，其中罗替戈汀1天累积释放量从9.10%增加到16.12%，4天 累积释放量从29.36%增加到53.34%；当两种不同分子量的PLGA重量比（PLGA75254A: PLGA50502.5A）为50:50时，与表1实施例3数据相比，1-4天的药物释放量增加，其 中罗替戈汀1天累积释放量从9.53%增加到12.32%，4天累积释放量从22.90%增加到 45.44%，同时释放周期平稳。

实施例21含硬脂酸（1%）且两种不同分子量PLGA组合（50:50）的罗替戈汀微球

称取罗替戈汀0.4507g，PLGA75254A0.5170g及PLGA50502.5A0.5177g（重量比 50:50）和硬脂酸0.0155g（1%），按实施例1的方法制备，即得罗替戈汀微球。

实施例22含硬脂酸（2.5%）且两种不同分子量PLGA组合（50:50）的微球

称取罗替戈汀0.4491g，PLGA75254A0.5060g及PLGA50502.5A0.5055g（重量比 50:50）和硬脂酸0.0371g（2.5%），按实施例1的方法制备，即得罗替戈汀微球。

实施例23含硬脂酸（7.5%）且两种不同分子量PLGA组合（50:50）的微球

称取罗替戈汀0.4510g，PLGA75254A0.4680g及PLGA50502.5A0.4701g（重量比 50:50）和硬脂酸0.1119g（7.5%），按实施例1的方法制备，即得罗替戈汀微球。

实施例24含硬脂酸（10%）且两种不同分子量PLGA组合（50:50）的微球

称取罗替戈汀0.4503g，PLGA75254A0.4479g及PLGA50502.5A0.4501g（重量比 50:50）和硬脂酸0.1520g（10%），按实施例1的方法制备，即得罗替戈汀微球。

实施例25含辛酸（2.5%）且两种不同分子量PLGA组合（50:50）的微球

称取罗替戈汀0.4490g，PLGA75254A0.5101g及PLGA50502.5A0.5091g（重量比 50:50）和辛酸0.0380g（2.5%），按实施例1的方法制备，即得罗替戈汀微球。

实施例26含木蜡酸（2.5%）且两种不同分子量PLGA组合（50:50）的微球

称取罗替戈汀0.4520g，PLGA75254A0.5055g及PLGA50502.5A0.5062g（重量比 50:50）和木蜡酸0.0379g（2.5%），按实施例1的方法制备，即得罗替戈汀微球。

实施例27含硬脂酸（2.5%）且两种不同分子量PLGA组合（95:5）的微球

称取罗替戈汀0.4507g，PLGA75254A0.9621g及PLGA50502.5A0.0505g（重量比 95:5）和硬脂酸0.0369g（2.5%），按实施例1的方法制备，即得罗替戈汀微球。

实施例28含硬脂酸（2.5%）且两种不同分子量PLGA组合（5:95）的微球

称取罗替戈汀0.4514g，PLGA75254A0.0501g及PLGA50502.5A0.9610g（重量比 5:95）和硬脂酸0.0370g（2.5%），按实施例1的方法制备，即得罗替戈汀微球。

试验例9含不同含量硬脂酸且不同分子量PLGA组合的罗替戈汀微球体外试验

取实施例21-24微球，体外释放试验方法同试验例1，结果见表6及图23-26。

表6含不同含量硬脂酸且两种不同分子量PLGA组合微球体外释药数据

将表6及图23-26与表5实施例19结果比较，可以看出，当两种分子量PLGA75254A 与50502.5A的组合重量比为50:50，微球中加入含量为2.5-7.5%的硬脂酸时，突释明显 降低，累积药物释放曲线更为接近线性。

试验例10含不同分子量的脂肪酸且不同分子量PLGA组合的罗替戈汀微球体外试验

取实施例22、25、26微球，体外释放试验方法同试验例1，结果见表7及图24、27、 28。

表7含不同分子量的脂肪酸且不同分子量PLGA组合的微球体外释药数据

将表7和图24、27、28与表5实施例19结果比较，可以看出在处方中加入含量为 2.5%的辛酸、硬脂酸和木蜡酸时，均可降低突释，药物从微球中的释放曲线趋于线性， 结果提示：碳原子数在8-24的脂肪酸均可以达到药物释放平稳的需求。

试验例11含硬脂酸（2.5%）且不同分子量PLGA以不同重量比组合的罗替戈汀微球体 外试验

取实施例22、27、28微球，体外释放试验方法同试验例1，结果见表8及图24、29、 30.

表8含硬脂酸且不同分子量PLGA以不同重量比组合的微球体外释药数据

从表8和图29、30可以看出，当硬脂酸含量为2.5%，两种分子量PLGA75254A与 50502.5A的重量比为95:5时，1-4天的药物释放量偏低，而重量比为5:95时，1-4天的 药物释放量偏高，且到第10天时累积释放已达93.26%，释放周期短；两种分子量 PLGA75254A与50502.5A的重量比为50:50时，药物释放相对平稳，可持续释放14天。 试验例12含硬脂酸（2.5%）且PLGA75254A与PLGA50502.5A按不同重量比混合的 微球的体内试验

将实施例8中的PLGA换成PLGA75254A和PLGA50502.5A不同比例（90:10，80:20， 70:30，50:50）制备微球，体内释放试验方法同试验例2，结果见图31。

由体内释放（图31）可以看出，两种不同分子量PLGA按不同重量比混合后，随着 PLGA50502.5A含量的增加，微球1-4天的释药量增加，体内释药曲线趋于平稳，当两 种分子量PLGA重量比为50:50时，体内释药曲线平稳且无明显突释效应。

以上研究结果表明，两种不同分子量的PLGA按不同重量比混合后可有效弥补单一 PLGA的缺点，即分子量15000-30000的PLGA（PLGA2.5A）可提高微球1-4天的释药 量，而分子量42000-75000的PLGA（PLGA4A）能够保证药物的释药周期，从而获得体 内释药平稳的微球。

试验例13含2.5%硬脂酸且PLGA75255A和PLGA50502.5A按不同重量比混合的微 球的体外试验

将实施例8中的PLGA换成PLGA（75255A）和PLGA（50502.5A）不同比例混合 （90:10，80:20，70:30）制备微球，体外释药试验方法同试验例1，体外释药数据见表9。 表9不同分子量的75255A和50502.5A组合（含硬脂酸）制备微球体外释药数据

由表9可以看出，PLGA（7525 5A）和PLGA（5050 2.5A）以不同重量比混合后， 制备的微球的释药特性与PLGA（7525 4A）和PLGA（5050 2.5A）制备的微球的释药特 性相似，随微球内PLGA（5050 2.5A）含量的增加，微球1-4天释药量随之增加，其中， 当7525 5A:5050 2.5A的重量比从90:10变化到70:30时，1天的累积释放量从4.28%增加 到7.64%，4天的累积释放量从24.29%增加到30.21%。由于微球中含有2.5%的硬脂酸， 微球0.125和1天的药物释放量较小，表明该微球的体内突释小。

试验例14罗替戈汀微球体外体内相关性试验

以实施例22的微球体外累积释放数据和体内释药数据作相关性图，见图32（线性 方程为 y=1.2137x - 3.7464，r=0.9943）。由图32可以看出，罗替戈汀微球体外药物释放 时间与体内吸收百分率具有较好相关性，表明选择的体外释放条件进行微球体外释放的 评价可用于预测微球体内释药情况。 试验例15 PLGA分子量的测定

仪器与试剂

Agilent 1100型高效液相色谱仪（包括四元泵、柱温箱、自动进样器、RID检测器、 HP-ChemStation带GPC软件）；色谱柱：（7.8x300mm，10μm，分子量范 围：500-30000，（7.8x300mm，10μm，分子量范围：5000-600000）；四氢呋 喃（色谱纯，SK CHEMICAL，G6EE3H）、聚苯乙烯分子量标准品（Fluka，1226627）测 定样品：PLGA 7525 5A，PLGA 7525 4A，PLGA 5050 2.5A（Lakeshore Biomaterials公司）

样品分子量的测定采用尺寸排阻色谱法。因高分子PLGA为脂溶性的，且无紫外吸 收，故采用四氢呋喃为溶剂及流动相，示差折光检测器进行检测；因高分子PLGA分子 量（M_w）约为50000，选择的色谱柱的分子量范围应包含此范围，并尽可能使所测样品 分子量分布范围处于中间位置，因此，选择（7.8x300mm，10μm，分子量 范围：500-30000）色谱柱与（7.8x300mm，10μm，分子量范围：5000-600000） 色谱柱串联使用；因PLGA的性质与聚苯乙烯类似，故选择的是Fluka公司提供的包含 样品分子量范围的聚苯乙烯混标标准品（分子量范围：500-2500000）。

测定方法

取测定样品适量，加流动相制成每1ml中约含1mg的溶液，振摇，作为供试品溶液。 另取聚苯乙烯分子量标准品1套（3瓶，每瓶为含4种标准分子量的混标），加流动相制 成1.0mg/ml的溶液，作为对照品溶液。照尺寸排阻色谱法（中国药典2005版二部附录 VH）测定，采用凝胶色谱柱，以四氢呋喃为流动相，柱温：30℃，流速为1.0ml/min， 示差折光检测器；检测器温度35℃。取乙腈所需量，用流动相稀释500倍，取稀释后溶 液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，理论塔板数按乙腈峰计不少于10000。

取上述对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，由GPC软件计算回 归方程。取供试品溶液20μl，同法测定，用GPC软件算出样品的重均分子量、数均分子 量及分子量分布。测定结果，如表10、11、12。

表10PLGA分子量测定结果

Lakeshore Biomaterials公司的PLGA检验报告，结果见表11。

表11PLGA分子量检验报告

表12PLGA分子量分布

本发明的某些PLGA分子量见表12。

试验例16批间一致性

按实施例3、8、11、12、14、16的方法分别制备5批微球，按试验例1方法进行体 外释放实验，实施例3制备的5批微球体外释药数据见表13，释药曲线见图32。

实施例8制备的5批微球体外释药数据见表14，释药曲线见图33。

实施例14制备的5批微球体外释药数据见表15，释药曲线见图34。

实施例16制备的5批微球体外释药数据见表16，释药曲线见图35。

实施例11制备的5批微球体外释药数据见表17，释药曲线见图36。

实施例12制备的5批微球体外释药数据见表18，释药曲线见图37。