大型蚤实验室快速培养装置和培养方法

摘要

大型蚤实验室快速培养装置和培养方法，属于浮游动物培养领域。所述培养装置包括支架、底板、水浴缸、蓄水缸、培养杯、加热棒、温度计、曝气泵、荧光灯、时间控制器；所述支架的底部设有底板，底板上放置有蓄水缸和水浴缸，蓄水缸内设有温度计、曝气泵和加热棒，水浴缸设有温度计、加热棒和培养杯；所述荧光灯位于支架斜上方并与支架平行，时间控制器与荧光灯连接。本发明简便易行，可操作性强，培养设备装置容易搭建，无需繁琐的设备结构；培养出的大型蚤繁殖速度快，数量大，而且生命状态稳定，个体差异小，使得蚤类毒性试验结果稳定，可靠，试验质量得以保证，同时可以为水处理行业中，去除水中浮游动物污染等试验提供足够的试验材料。

说明书

技术领域

本发明属于浮游动物培养领域，涉及一种大型蚤的培养装置及其培养方法。

背景技术

大型蚤(Daphnia magna)属于节肢动物门、甲壳纲、枝角类，是一种常见的淡水浮游动物，在水域生态系统中具有重要地位。由于它具有分布广泛，生活周期短，繁殖速度快，生殖量高，易于培养，对毒物敏感等特点而被广泛的应用于水生生物毒性试验。

目前大型蚤是国际公认的标准试验指示生物，同时许多国家也已建立了大型蚤毒性测试标准方法，对试验大型蚤的培养条件做了相关的规定。但是目前我国大多数实验室的大型蚤培养缺少有效的培养条件或装置，难以保证培养效果，这使得大型蚤的培养环境不够稳定，大型蚤很难长期保持孤雌生殖，大型蚤数量很难保证。因此很难获取试验所需的大型蚤，比如大型蚤龄期不同，个体不够整齐，生命状态不同等，这些都会对试验结果产生较大的影响，试验质量得不到保证。

发明内容

本发明的目的是克服现有大型蚤培养技术的缺陷，提供一种改进的实验室大型蚤培养装置及利用该大型蚤培养装置进行大型蚤培养的方法。该装置可以在人工控制条件下，实现大型蚤迅速稳定繁殖，并长期处于孤雌生殖状态，个体整齐均匀，生命状态活泼，可保证大型蚤毒性试验的质量，并且比标准方法简单易行，符合实验室快速培养和使用的要求。

本发明的大型蚤实验室快速培养装置包括支架、底板、水浴缸、蓄水缸、培养杯、加热棒、温度计、曝气泵、荧光灯、时间控制器；所述支架的底部设有底板，底板上放置有蓄水缸和水浴缸，蓄水缸内设有温度计、曝气泵和加热棒，水浴缸设有温度计、加热棒和培养杯；所述荧光灯位于支架斜上方并与支架平行，时间控制器与荧光灯连接。

上述装置中，所述的支架为三角铁搭建而成，共分三层，每层高度可调，最底层放置一个蓄水缸，上两层每层放置两个水浴缸。

上述装置中，所述的每层支架的底部设有底板，该底板可以是木质也可以是玻璃制，保证具有足够的承载力即可。

上述装置中，所述的水浴缸为玻璃制、方形，在水浴缸侧壁靠近底部用吸盘将加热棒固定在水浴缸内，每个水浴缸设有一个温度计、两个加热棒、六个培养杯。

上述装置中，所述的蓄水缸为玻璃制、方形，在蓄水缸侧壁靠近底部用吸盘将加热棒固定在蓄水缸内，每个蓄水缸设有一个温度计、一个曝气泵、两个加热棒。

上述装置中，所述的培养杯为可以盛装2000ml水的圆型玻璃制品，一次成型无粘结材料。

上述装置中，所述的加热棒为可以大致调节温度的家用养鱼加热棒。

上述装置中，所述的温度计指示水浴缸和蓄水缸温度，配合加热棒调节大型蚤培养温度。

上述装置中，所述的曝气泵给蓄水缸中水持续不间断曝气，以去除水中余氯。

上述装置中，所述的荧光灯距离支架斜上方2~3米，并与支架平行。

上述装置中，所述的时间控制器与荧光灯链接，以控制光照时间。

一种利用上述装置培养大型蚤的培养方法，具体步骤如下：

（1）将自来水倒入水浴缸和蓄水缸，将曝气泵打开，对蓄水缸自来水进行连续曝气，以去除自来水中余氯，同时利用加热棒和温度计将水浴缸和蓄水缸中水温调节到20±1℃；

（2）将曝气三天以上的蓄水缸中的水加到培养杯中，每杯2000ml，在培养杯中接种纯种的、刚出生6~24h的大型蚤幼蚤，每个培养杯接种70到80个，同时记录接种日期；

（3）将不含培养基的普通小球藻稀释于培养杯中，使得培养杯呈现淡绿色；

（4）调整荧光灯的位置，使培养杯处光照强度为800~1000lux；

    （5）培养期间，每3天更换培养杯中大型蚤培养液，每次更换500ml，所换水为蓄水缸中，曝气三天以上，温度为20±1℃的水，同时清除沉积在培养杯底部的大型蚤脱壳、藻团及死亡大型蚤，之后追加食物，使得培养杯呈现淡绿色；

（6）当大型蚤产生幼蚤时，用合适孔径的筛网分离母蚤和幼蚤，淘汰16日龄之前母蚤所产幼蚤，母蚤放回原培养杯继续培养；

（7）收集16~22日龄母蚤所产6~24h幼蚤进行试验或接种到另外一个培养杯中继续培养，并记录日期；

（8）待大型蚤超过22日龄即可淘汰。

按照上述方法即可得到培养3代以上的大型蚤，而且同为16-22日龄母蚤所产幼蚤，它们数量大，个体均匀，生长速度快，繁殖能力强，生命状态稳定。

本发明具有如下有益效果：

（1）本发明提供的大型蚤实验室快速培养装置结构简单、制造和维护方便，费用少，材料来源广，容易搭建。并且能够合理利用实验室立体空间，减少占地面积。

（2）本发明提供的大型蚤实验室快速培养方法能在室内条件下长年培养，大型蚤繁殖量大，生长速度快，为大型蚤毒性测试随时提供充足的，能够保证试验质量的试验材料。另外，由于大型蚤数量大，可以为水处理行业中，去除水中浮游动物等试验提供足够的试验材料。

（3）本发明提供的大型蚤实验室快速培养方法无需频繁换水，而且每次换水量少，大大减少了工作量。

（4）本发明提供的大型蚤实验室快速培养方法选择普通小球藻为大型蚤食物，由于普通小球藻悬浮性好，不易沉淀，可以使食物均匀分散于大型蚤培养杯中，利于大型蚤滤食。同时可以避免绿藻附着于大型蚤触角上，从而影响大型蚤运动能力，生命状态及繁殖能力等不利问题。

（5）此培养方法可使大型蚤光照环境稳定，防止大型蚤局部密度过大，使得培养杯中母蚤密度稳定，时刻保持孤雌生殖状态。

附图说明

图1为大型蚤实验室培养装置立体图示意图；

图2为大型蚤实验室培养装置主视图示意图；

图3为大型蚤实验室培养装置侧视图示意图。

具体实施方式

以下结合附图对本发明做进一步详细说明。本实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。

如图1-3所示的大型蚤实验室培养装置，它包括支架1、底板2、水浴缸3、蓄水缸4、培养杯5、加热棒6、温度计7、曝气泵8、荧光灯9、时间控制器10。

该装置各个主要构件的名称，材料及规格如下：

支架1：铁制，长120cm，宽40cm，高150cm。共分三层，最上层30cm，中间层和最下层55cm。

底板2：木制，也可玻璃制，具有足够的承载力，长120cm，宽40cm。

水浴缸3：玻璃制，长55cm，宽30cm，高20cm。

蓄水缸4：玻璃制，长110cm，宽30cm，高20cm。

培养杯5：玻璃制，一次性成型，无黏合剂，圆形，直径14cm，高20cm，也可用2000ml烧杯代替。

加热棒6：100w，温度可调18-32℃。

温度计7：可测20±1℃。

曝气泵8：5w。

荧光灯9：功率40w。

时间控制器10：可编程。

将支架1按照所述每层高度调整好，将底板2放置在每层支架1上。上两层放置水浴缸3，每层两个，最下层放置一个蓄水缸4。将加热棒6置于水浴缸3和蓄水缸4侧壁靠近底部位置，每个加热棒6用两个吸盘固定，每个水浴缸3和蓄水缸4放置两个加热棒6。将培养杯5置于水浴缸3中，每个水浴缸3放置六个培养杯5。将曝气泵8置于蓄水缸4中。将温度计7置于水浴缸3和蓄水缸4中，每缸一个。将荧光灯9置于支架1斜上方2~3米，并与支架1平行。荧光灯9与时间控制器10链接，以控制光照时间。

按照上述尺寸及方法，搭建大型蚤培养装置进行大型蚤培养，培养方法包括如下步骤：

（1）将适量自来水倒入水浴缸和蓄水缸，将曝气泵打开，对蓄水缸自来水进行连续曝气，以去除自来水中余氯，同时利用加热棒和温度计将水浴缸和蓄水缸中水温调节到20±1℃。

（2）将曝气三天以上的蓄水缸中的水加到培养杯中，每杯2000ml，在培养杯中接种纯种的、刚出生6~24h的大型蚤幼蚤，每个培养杯接种70到80个，接种数目不易过多，在此密度下，大型蚤生长速度快，繁殖量大，同时记录接种日期。

（3）将不含培养基的普通小球藻稀释于培养杯中，使得培养杯呈现淡绿色（普通小球藻密度约为1×10⁶~4×10⁶ 个/ml）。本发明推荐使用普通小球藻来喂食大型蚤，其原因是普通小球藻粒径较小，悬浮性较高，沉淀较少，可以比较均匀的分布于培养杯中。一方面使大型蚤在培养杯各处都可滤食食物，另一方面可防止底部藻液浓度过高，附着于大型蚤触角上，影响大型蚤正常运动，从而影响其生命状态及繁殖能力。

（4）在距离培养杯2~3米的范围内调整荧光灯的位置，使培养杯处光照强度为800~1000lux（如果光照强度不足可以增加荧光灯数量），同时大型蚤均匀分散于培养杯中。防止由于大型蚤的趋光性而造成的局部密度过大，影响大型蚤孤雌生殖。用时间控制器，控制每天光照16h，黑暗8h。

（5）培养期间，每3天更换培养杯中大型蚤培养液，每次更换500ml，所换水为蓄水缸中，曝气三天以上，温度为20±1℃的水，防止环境骤变影响大型蚤生活状态，同时清除沉积在培养杯底部的大型蚤脱壳、藻团及死亡大型蚤，之后追加食物，使得培养杯呈现淡绿色。

（6）培养到7天左右时，大型蚤就会产生第1胎幼蚤（即第7日龄母蚤所产幼蚤），用上下套合在一起的筛网分离母蚤和幼蚤，上层筛网为30目，下层筛网为60目。此时所产幼蚤一般数量少，体型小，不稳定，弃之。母蚤放回原培养杯继续培养。

（7）此后大约每3天就会有新的一胎幼蚤产生。本发明推荐选择16~22日龄母蚤所产幼蚤进行大型蚤毒性试验。因此，淘汰16日龄之前母蚤所产幼蚤，收集16~22日龄母蚤所产6~24h幼蚤进行试验或接种到另外一个培养杯中继续培养，并记录日期。

（8）待大型蚤超过22日龄即可淘汰。

按照上述方法即可得到培养3代以上的大型蚤，而且同为16~22日龄母蚤所产幼蚤，它们数量大，个体均匀，生长速度快，繁殖能力强，生命状态稳定，非常适合用于大型蚤毒性测试试验。另外，由于大型蚤数量大，可以为水处理行业中，去除水中浮游动物等试验提供足够的试验材料。