一种重组猪流行性腹泻病毒N、S蛋白单克隆抗体的制备方法

摘要

本发明涉及一种重组猪流行性腹泻病毒N、S蛋白单克隆抗体的制备方法，首先设计特异性的引物，得到重组表达载体PcoldI‑N、PcoldI‑S，转入大肠杆菌Rosseta后，经IPTG诱导获得重组蛋白；利用亲和柱对重组蛋白进行纯化；以纯化的重组蛋白作为免疫原，取6‑8周龄Balb/c雌性小鼠，按照免疫程序进行免疫，取免疫小鼠脾细胞与S/P20细胞融合，利用间接酶联免疫吸附实验（ELISA）筛选出阳性杂交瘤细胞株；将筛选出的阳性杂交瘤细胞株经过三次亚克隆，得到3株抗PEDV N蛋白特异性杂交瘤细胞株；将3株抗PEDV N蛋白特异性杂交瘤细胞株分别注入小鼠腹腔，收获腹水并进行纯化，最终获得了具有高纯度高特异性的抗PEDV单克隆抗体。通过本发明，能够获得了具有高纯度高特异性的抗PEDV单克隆抗体。