STUDY ON THE CONSTRUCTION AND IMMUNOLOGY CHARACTERISITCS of SIX-VA-LENT FUSION TOXIN of FOOD POISONING-BORNE BACTERIA

摘要

[目的]构建4种食源性致病菌融合毒素基因及重组表达载体,制备六联融合毒素的血清抗体。[方法]采用柔性lInkEr序列(g-g-g-g-S)对目的基因进行串联(HblA-VT1b-SEA-VT2b-bOnTAHC-SEb),构建重组表达质粒PET-22b(+)-f6并在E.COlI bl21中进行表达,将表达蛋白纯化后免疫豚鼠制备血清抗体,利用ElISA和琼脂扩散试验验证抗体的特异性与敏感性。[结果]成功构建了重组表达质粒PET-22b(+)-f6并在E.COlI bl21中成功表达,37℃表达蛋白主要以包涵体形式存在(表达量10.2%),基因序列全长3384bP,编码1127个氨基酸,蛋白分子量为127205,测序结果与设计序列一致性为100%。ElISA和琼脂扩散试验表明,融合毒素f6与4种食源性致病菌有良好的反应原性,与多种非目标菌不反应。[结论]成功构建了多联融合毒素基因的表达质粒及制备了抗血清,为利用融合毒素的方法检测食源性致病菌,进而建立食源性致病菌广谱、快速的检测方法奠定基础。