荧光各向异性法均相检测酸性、中性和碱性介质中的蛋白酶

摘要

建立了一种基于荧光各向异性原理均相测定蛋白酶及其抑制剂的方法。具有如下特点:灵敏度高(可测到纳克级的蛋白酶);是一种均相检测方法,可对酶反应体系进行实时跟踪检测;作用底物是蛋白酶的天然底物—蛋白质;适用的pH值范围宽(pH 2.0~10.0),可用于酸性、中性和碱性介质中蛋白酶的测定;所用荧光标记物TMR ITC的发射波长(581 nm)大于荧光素类(520 nm),有利于减少散射光的干扰,提高了荧光各向异性测量的稳定性。还可应用于蛋白酶抑制剂的检测。