戊型肝炎病毒ORF2片段在毕赤酵母中的分泌表达及活性鉴定

摘要

为了寻求新型表达系统来研制戊型肝炎病毒基因工程疫苗,利用Pichiapastoris表达系统表达戊型肝炎病毒(HEV)结构区ORF2基因.利用PCR扩增HEVORF2基因,然后将ORF2基因按正确的阅读框融合到Pichiapastoris分泌型表达载体pPIC9K的а因子信号肽编码序列3′端,重组表达载体在电击转化毕赤酵母,经过含G418的营养缺陷型培养基(RDB)筛选、重组酵母基因组总DNA进行PCR鉴定后,证实HEVORF2基因已经整合到酵母基因组中并得到重组转化子.表型鉴定后对G418具有不抗性的重组菌株诱导表达,用双抗体夹心法ELISA筛选了表达外源蛋白的重组菌株,再经SDS PAGE与Westernblot证实ORF2基因在Pichiapastoris中实现了分泌表达,而且重组蛋白具有较强的特异性与生物学活性;同时用双抗体夹心法证实在Pichiapastoris表达的上清中存在衣壳蛋白聚体.