马铃薯遗传转化系统的优化及禽流感病毒(H5N1)基因的导入

摘要

通过对以马铃薯 (Solanum tuberosum L .)块茎为受体的农杆菌转化系统进行优化 ,筛选出使三个品种 (鲁引 1号、克新 3号、优金 )的受体均可得到高频分化的培养基 :MS+2 .0 mg/L BA+3.0mg/L ZT+0 .5mg/L NAA+0 .5mg/L GA.对几种农杆菌转化条件的比较研究发现 ,菌体用 Ms+0 .5mg/L GA液体重悬并稀释 4倍 ,与受体于 2 8℃ ,10 0 r/min振荡侵染 2 0～ 30 min,共培养时在分化培养基上加 30 μ mol/L AS(乙酰丁香酮 ) ,16 h弱光照共培养 3d,可使马铃薯品种鲁引 1号的转化效率较常规方法提高 5～ 7倍 .将禽流感病毒 (H5N1)基因与 35S启动子及 nos终止子构建表达载体 p130 1H5N1,直接法转入农杆菌 EHA10 5,用此菌株转化马铃薯得到再生植株 .基因组总 DNA经 PCR和 Southern杂交证明目的基因已整合到马铃薯基因组中