Detection of BCR-ABL fusion gene by multiplex RT-PCR combining with capillary electrophoresis

摘要

目的建立多重逆转录-聚合酶链反应(rT-PCr)联合毛细管电泳法检测bCr-Abl融合基因,以期应用于慢性粒细胞白血病(CMl)辅助诊断。方法采用重叠延伸法构建bCr-Abl融合基因阳性模板,设计并优化检测bCr-Abl融合基因的多重rT-PCr联合毛细管电泳体系,对检测体系进行初步的性能评估。结果多重rT-PCr技术检测bCr-Abl融合基因(E1A2、E13A2和E14A2)的最低检测限在102~103拷贝/μl;50例临床确诊CMl的患者应用该法检测bCr-Abl融合基因的阳性率为86.0%,其中E13A2型(20.0%),E14A2型(66.0%);本方法与骨髓细胞培养染色体核型分析相比,阳性符合率为97.6%,阴性符合率为75.0%,总符合率为94.0%,2种方法具有较高的一致性(kAPPA=0.765,P>0.05)。结论成功建立检测bCr-Abl融合基因的多重rTPCr联合毛细管电泳方法。该方法操作简单快捷、特异性好、灵敏度高,适合于临床上CMl的辅助诊断和分子分型。