Caractérisation de la protéine Knr4 et recherche de ses partenaires fonctionnels pour la compréhension de son rôle dans la synthèse pariétale chez la levure Saccharomyces cereviasiae

摘要

La paroi de Saccharomyces cerevisiae est une structure protectrice extracellulaire dont la synthèse est contrôlé par une voie de signalisation cellulaire MAPkinase. Au sein de cette voie, la protéine Knr4 jouerait un rôle dans la coordination de la synthèse de paroi avec l’émergence du bourgeon et la croissance cellulaire. Cette protéine, dont le gène correspondant avait initialement été cloné par complémentation d’un mutant résistant à la toxine killer K9, a fait l’objet d’une étude fonctionnelle. Dans un premier temps, nous avons présenté des arguments expérimentaux suggérant que cette protéine présente une structure secondaire et tertiaire atypique, et qu’elle fait partie d’un complexe protéique. En appliquant des techniques génétiques (létaux synthétiques, double-hybride) et biochimiques (purification des protéines par affinité en tandem), nous avons pu établir une carte d’un réseau de l’interaction "in vivo" de cette protéine. L’ensemble des partenaires protéiques identifiés ont confirmé que cette protéine intervenait dans deux processus biologiques majeurs : la synthèse de la paroi et l’établissement de la polarité de la cellule. Enfin, nous avons montré que la phosphorylation de deux résidus sérine (S200/S203) semble nécessaire pour obtenir une interaction optimale avec ses partenairesud_________________________________________________________________________________________________________udThe cell wall of Saccharomyces cerevisiae is a protectrice extracellular structure. Its synthesis is mainly under controlled by a MAP kinase signalisation pathway. Related to this pathway, the protein Knr4 implicated in the coordination of the cell wall synthesis with bud emergence. This protein, whose gene was originally isolated by complementation of a mutant resistant to the toxin killer K9, has been the subject of a functional study. First, we provided several experimental arguments suggesting that this protein displays an unfolded secondary and tertiary structure and takes part of a multiprotein complex. Secondly, by applying genetic (Synthetic lethal and Two-hybrid system) and biochemical techniques (Tandem affinity Purification) we established a map of an "in vivo" interaction network for this protein. The interaction identified show that Knr4p is associated to two major biological processes: the cell wall synthesis and the establishment of the cellular polarity/bud emergence. Furthermore, we showed that the phosphorylation of two serines residues (S200/S203) seems necessary to obtain an optimal interaction of this protein with its partners. Taken together, these results consolidates the notion that Knr4 is one of the proteic elements physically connecting the cell wall synthesis and the budding machinery during cell growth.