Vers la modélisation physiopathologique de la granulomatose septique chronique pour de nouvelles approches thérapeutiques (développement de la culture des cellules souches pluripotentes induites issues de fibroblastes de patients)

摘要

La Granulomatose septique chronique (CGD) est une maladie immunitaire et héréditaire rare diagnostiquée devant des infections sévères et récidivantes. La forme majoritaire de transmission liée à l X (CGDX) est causée par des mutations dans le gène CYBB codant la sous-unité NOX2 du complexe NADPH oxydase, enzyme clé de la production de réactifs toxiques de l oxygène (ROS) bactéricides par les cellules phagocytaires. Afin de développer de nouvelles approches thérapeutiques, il est nécessaire de posséder des modèles cellulaires mimant la maladie. Les cellules souches pluripotentes induites (iPS) représentent un outil inestimable pour la modélisation physiopathologique. L objectif de ce projet était de mettre en place au laboratoire la culture et la caractérisation des cellules iPS pour modéliser la CGD. Pour cela, des cellules iPS reprogrammées à partir de fibroblastes d un sujet sain et d un patient atteint de CGDX ont été cultivées avec succès à la fois sur cellules nourricières et sur matrice extracellulaire. Leur capacité de pluripotence a été validée d une part par l expression de marqueurs de pluripotence par immunofluorescence et cytométrie en flux, et d autre part grâce à la formation de corps embryoïdes constitués de cellules dérivées des trois lignées embryonnaires. L analyse du caryotype n a pas montré d anomalie chromosomique. Enfin, la mutation du patient à l origine de la CGD a été retrouvée dans les cellules iPS-CGDX. Les cellules iPS témoin et CGDX pourront donc être différenciées en progéniteurs hématopoïétiques pour la génération de souris humanisées, modèles de CGDX et pour l obtention de cellules phagocytaires pour le développement de nouvelles thérapies.