Développement de nanovecteurs polymériques et lipidiques fonctionnalisés par des anticorps pour cibler des cellules cancéreuses

摘要

Ce travail, qui fait partie d un projet européen, NANOTHER , est focalisé sur la fonctionnalisation de nanoparticules polymériques et lipidiques fonctionnalisées par des anticorps Herceptine® pour cibler des cellules du cancer du sein HER2+. Deux stratégies de fonctionnalisation ont été étudiées : une a reposé sur l utilisation de protéines de fusion, l Anx5-ZZ, composée d Annexine A5 et deux domaines Z homologues de la protéine A de Staphylococcus aureus qui peuvent se fixer des anticorps d une manière orientée par leur fragment cristallisable; l autre a porté sur le couplage direct d anticorps modifiés pour exposer des groupes sulfhydryles aux nanoparticules exposant des groupes maléimides.La première partie concerne le développement d un agent de ciblage simplifié du complexe l Anx5-ZZ-anticorps, à savoir l Anx5-scFv (single-chain variable fragment). Puisque la cible n avait pas été décidée au début de ce travail, deux scFvs ont été utilisé comme système modèle. L expression de protéines de fusion a été essayée chez Escherichia Coli avec différentes constructions de protéines de fusion, différentes conditions d expression et différentes souches bactériennes. Toutes les protéines sont soient agrégées soient non surexprimées.La deuxième partie consiste à fonctionnaliser les polymersomes par l Herceptine® via l Anx5-ZZ. D abord, nous avons validé une méthode de modification de la surface de polymersome pour présenter des groupes maléimides. Ensuite, le couplage covalent de l Anx5(SH)-ZZ aux polymersomes-maléimide a été réalisé et quantifié. Nous avons obtenu maximum 30 Anx5-ZZ par polymersome. Puis, la liaison d affinité d anticorps aux polymersomes-Anx5-ZZ a été caractérisée, réalisée et quantifiée. Pour 30 Anx5-ZZ par polymersome, nous avons 60 Herceptine® par polymersome. Cependant, l efficacité de ciblage de ces systèmes est très faible.La troisième partie consiste à fonctionnaliser les liposomes par l Herceptine® via couplage direct. Tout d abord, la modification de l Herceptine® pour présenter des groupes SH a été caractérisée et contrôlée. Ensuite, le couplage covalent d Herceptine®-SH aux liposomes-maléimides a été réalisé et quantifié. L étude de ciblage montre que les liposomes fonctionnalisés par une molécule d Herceptine® sont capable de cibler les cellules HER2+.