Búsqueda de biomarcadores de artrosis mediante técnicas proteómicas

摘要

[Resumen]La Artrosis (OA) es la enfermedad reumática más frecuente e invalidante a nivelmundial. Se caracteriza principalmente por una degradación progresiva del cartílagoarticular pero también por cambios en el hueso subcondral y la inflamación de lamembrana sinovial. Pese a su elevada prevalencia, los métodos de diagnóstico actualesde la OA son poco sensibles y no existe tratamiento eficaz frente a la enfermedad.Estas limitaciones han originado un considerable interés por encontrar marcadoresbiológicos específicos que reflejen las variaciones cuantitativas y dinámicas de laremodelación de la articulación durante la artrosis.Teniendo en cuenta que el proceso de OA implica diferentes tejidos y complejosprocesos biológicos, la estrategia diagnóstica más prometedora podría ser lacombinación del estudio de diferentes biomarcadores con el fin de facilitar el diagnósticoprecoz, evaluar la progresión de la enfermedad y posibilitar la monitorización de terapiasalternativas.Así, en esta tesis se han empleado diferentes técnicas proteómicas de expresióndiferencial basadas en espectrometría de masas y en arrays de proteínas para abordarel estudio de la búsqueda de potenciales biomarcadores de artrosis.En el primer trabajo presentado, se analizó el perfil de degradación del cartílagoartrósico con la finalidad de identificar potenciales marcadores tempranos y deprogresión de la enfermedad. Para ello, se utilizaron muestras de diferentes zonas delcartílago artrósico humano y también cartílago sano. En este estudio, se identificó unpanel de 76 proteínas que estaban diferencialmente liberadas por el cartílago artrósicoal compararlo con el cartílago sano. A continuación, se validó por inmunodetección elpotencial de dos proteínas como marcadores de progresión de la degradación delcartílago artrósico. En el segundo trabajo, se utilizaron muestras de líquido sinovial depacientes con OA y pacientes con artritis reumatoide (AR), con el objetivo decaracterizar el perfil proteico del líquido sinovial en la OA. Posteriormente, se validaronpor inmunodetección los resultados obtenidos para 4 de las proteínas cuantificadas porespectrometría de masas.A continuación, utilizamos arrays de proteínas para buscar potencialesbiomarcadores séricos de la OA.Así, en el tercer trabajo, se utilizaron muestras de suero de pacientes conartrosis, artritis reumatoide y controles sanos con el objetivo de identificarautoanticuerpos con potencial biomarcador de la artrosis empleando arrays de antígenos. En este trabajo, detectamos que los niveles de inmunorreactividad frente a 7antígenos permitían distinguir los pacientes artrósicos de los individuos sanos mientrasque los niveles de inmunorreactividad frente a otros 7 antígenos, permitían distinguirentre los pacientes con OA y con AR.Por último, se construyeron arrays de anticuerpos en suspensión con el fin deidentificar, en un gran número de muestras, un panel de proteínas en el suero conpotencial biomarcador para el diagnóstico de la artrosis. Esta metodología se utilizópara analizar muestras de suero de pacientes con diferentes enfermedades reumáticas(artrosis, artritis reumatoide y artritis psoriásica) e individuos sanos. Los resultadosobtenidos proporcionaron un perfil proteico con potencial biomarcador para eldiagnóstico de la artrosis de rodilla.