Diagnóstico de paludismo aviar en pollos (Gallus gallus) a través de la técnica de PCR convencional en el municipio la Gomera, departamento de Escuintla, Guatemala.

摘要

Se tomaron 100 muestras de sangre entera aviar en siete aldeas de La Gomera,Escuintla, procesándose solo 82 por PCR. ; se analizaron las muestras para diagnosticar malaria aviar usando cebadores que amplifican el gen LS1. Cada reacción incluyó 1.5 mMde MgCl2, 25 µL de buffer PCR (NovaTaq™ PCR Master Mix ), 0.2 µM de cada cebador, 15 µL agua grado molecular y 5 µL de ADN molde. Estas muestras se amplificaron y visualizaron bajo luz UV, para observar un amplicón final de 281 pares de bases. No se encontraron muestras positivas a malaria aviar, debiéndose a: (1) Uso del kit de extracción Wizard Promega, que no produce ADN puro; (2) En La Gomera no se hicieron estudios previos para identificar al agente causal de malaria aviar, los cebadores probablemente no concordaron con ADN molde y (3) Uso de cebadores diseñados a partir de regiones más polimórficas entre dos agentes de la malaria aviar, en lugar de diseñados a partir de las áreas genéticas más conservadas. Se recomienda usar muestras almacenadas en buffer con EDTA, pero sin SDS, para inactivar las nucleasas liberadas por células dañadas. También, se debe optimizar la concentración de cebadores, Mg2 +, condiciones y número de ciclos en la amplificación; poner especial atención a la dilución de las muestras y pureza del ADN para trabajar con una muestra de buena calidad; también recomiendase realizar un PCR anidado buscando especies de Plasmodium, según protocolo de Ribeiro et.al. (2005).