In situ hibridizáció különböző módszereinek adaptálása és továbbfejlesztése búza genetikai alapanyagok elemzésére = Adaptation and development of different methods of in situ hybridization for the analysis of wheat genetic stocks

摘要

Pályázatunk során a legfontosabb célkitűzésünk volt olyan in situ hibridizációs módszerek adaptálása és továbbfejlesztése laboratóriumunkban, amelyek alkalmasak transzgének kimutatására is, valamint a csoportunkban korábban faj- és nemzetségkeresztezéssel létrehozott közeli rokonságban lévő hibridekben és azok származékaiban az idegen fajból származó kromoszómák kimutatása. A fiber-FISH technikát sikerrel adaptáltuk a molekuláris citogenetika csoportban. A kihúzott DNS fonalakat előállítottuk izolált sejtmagokból ill. flow-sorted kromoszómákból. Megkezdtük a különböző technikákkal elkészített preparátumok és a módszer tesztelését, egymástól eltérő, fluorokrómokkal jelölt próbát használtunk, amely a transzgént különböző formában tartalmazta. Sikerrel oldottuk meg a búza-Ae. biuncialis hibridek származékaiban az Ae. biuncialis kromoszómák kimutatását genomikus in situ hibridizációval (GISH). Bevezettük a PRINS in situ hibridizációs technikát (primed in situ labeling). PCR alkalmazásával előállított GAA trinukleotid szekvenciák segítségével végeztük el az Ae. biuncialis kromoszómák azonosítását a búza genomjában. | The main aim of the project was to adapt and improve in situ hybridisation methods that were suitable for the detection of transgenes, and to detect chromosomes from alien species in closely related hybrids previously developed by the team from interspecific and intergeneric crosses, and in their progeny. The fibre-FISH technique was successfully adapted by the molecular cytogenetics team. Extended DNA fibres were produced from isolated cell nuclei or from flow-sorted chromosomes. Work has begun on the testing of the method and of preparations made using various techniques using various probes labelled with fluorochromes and containing the transgene in various forms. The Ae. biuncialis chromosomes in derivatives of wheat?Ae. biuncialis hybrids were successfully detected using genomic in situ hybridisation (GISH). The PRINS in situ hybridisation technique (primed in situ labelling) was also introduced. With the aid of GAA trinucleotide sequences developed using PCR, the Ae. biuncialis chromosomes in the wheat genome have been analyzed.