ErbB receptorok szerepe emlőtumorok terápiájában és prognózisában = Role of erbB receptors in the therapy and prognosis of breast tumors

摘要

Eredményeink: Emlő és gyomorrák sejtek felszínén az overexpresszált ErbB2 lipid raftokban helyezkedik el, melyek szabályozzák internalizációját, és kölcsönhatásait más ErbB fehérjékkel. Emellett a β1 integrin is megjelenik a lipid raftokban, mennyisége trastuzumab (TR, anti-ErbB2 terápiás antitest) rezisztens sejtvonalakban magasabb. Az ErbB receptorok lokális stimulációja magas receptor expresszió esetén is lokalizált aktivációhoz vezet, a más ErbB molekulák transzaktiválhatósága a receptorok sűrűségétől függ, és TR rezisztens sejteken az ErbB2 szialomucinok okozta sztérikus gátlás miatt nem köti a TR-t. Optimalizáltuk a FRET mérések fluorofor választását, FRET segítségével megmértük az ErbB2 molekula egyes epitópjainak egymástól és a sejtmembrántól való távolságát, kidolgoztuk a majdnem teljes ErbB2 molekuláris modelljét: feltételezhető, hogy az ErbB2 dimer teljes aktiválásához további ErbB molekulák szükségesek. Kimutatuk, hogy a Hsp90 dajkafehérje stabilizálja az ErbB2-t, megakadályozva aktiválódását és internalizálódását, a Hsp90 gátló 17-AAG hatékony a TR rezisztens tumorok proliferációjának gátlásában is. Rámutatunk, hogy az ErbB1 internalizációjához elegendő egyetlen monoubikvitin c-Cbl általi kapcsolása. Funkcionális ErbB1-eGFP kimérát állítottunk elő, mellyel egyedi ErbB1 molekulák diffúzióját jellemeztük élő sejtek membránjában és szubcelluláris kompartmentjeiben. Módosított membránmodellt dolgoztunk ki, melynek kulcseleme a dinamizmus és a szervezettség. | Results: ErbB2 overexpressed on breast and gastric cancer cells is preferentially localized in lipid rafts that regulate its internalization and interactions with other ErbB proteins. β1 integrins also colocalize in lipid rafts, their quantity is higher in cell lines resistant to trastuzumab (TR, an anti-ErbB2 therapic antibody). Local stimulation of ErbB receptors causes local activation even at high expression levels, transactivation of other ErbBs is a function of receptor density. On TR resistant cells TR binding by ErbB2 is sterically hindered by sialomucins. We have developed a method to optimally choose fluorophor pairs for FRET measurements, determined the distance of various epitopes of ErbB2 from each other and the cell membrane using FRET and used the data to create the nearly full length molecular model of ErbB2, which suggests that further ErbB molecules are needed to fully activate the ErbB2 dimer. Hsp90 appears to stabilize ErbB2 preventing its activation and internalization. Its inhibitor 17-AAG effectively inhibited the proliferation even of TR resistant cancer cells. We showed that a single monoubiquitin ligated by c-Cbl is sufficient for the internalization of ErbB1. We produced a functional ErbB1-eGFP chimera and used it in correlation spectroscopy to characterize diffusion of single ErbB1 molecules in the membrane and subcellular compartments of living cells. We have elaborated a modified membrane model termed dynamically structured mosaic model.