Antigén-bemutató sejtek és polarizált TH-limfociták kapcsolata; kostimulációs kölcsönhatások és az immunológiai szinapszis = The antigen presenting cell - T cell contact; costimulation and the immunological synapse

摘要

Öt (1 TH1, 2 TH2 és 2 TH0) hosszútávon stabilnak bizonyult egér TH hibridómát állítottunk elő és jellemeztünk részletesen. Vizsgáltuk az IL-4, GATA-3, IFNgamma és Tbet génexpressziókat, a GM-CSF, IL-2, IL-4 és IFNgamma szekréciós képességet, a TH fenotípus stabilitását, az aktiválhatóság, a homing tulajdonság és a membrán raftok szempontjából jellemző sejtfelszíni markerek megjelenését, a kalcium-válasz kiválthatóságát és karakterisztikáját, a nyugvó és aktivációt követő fehérje foszforilációs mintázatot, valamint a membrán koleszterin tartalmának és a raftok mennyiségének összefüggéseit, továbbá a TCR raft asszociáltságát. Ezek alapján jellegzetes különbségeket mutattunk ki az eltérő fenotípusú TH sejtek között. Az antigén bemutató sejtek tulajdonságainak feltérképezése kapcsán különböző B-limfocita és makrofág eredetű sejtvonalak tulajdonságait vizsgáltuk a sejttípusra jellemző illetve az antigén bemutató kapacitás szempontjából kiemelt sejtfelszíni molekulák jelenléte és a sejt funkcionális képességei szempontjából. Megállapítottuk a membrán gangliozid (GM1, GM3) (raft)-mennyiség és az antigén bemutató valamint fagocita képesség összefüggését. A membránban a raft komponens koleszterin tartalmának vizsgálatához anti-koleszterin egér monoklonális ellenanyagokat fejlesztettünk ki, melyek nemcsak a sejtmentes és sejtes közegben történő koleszterin kimutatásra bizonyultak alkalmasnak hanem segítségükkel bizonyos koleszterin-függő sejtfunkciók modulálhatók. | Five (1 TH1, 2 TH2 és 2 TH0) mouse TH hybridomas with long-term stability were established and characterized in detail. IL-4, GATA-3, IFNgamma and Tbet gene expressions, GM-CSF, IL-2, IL-4 and IFNgamma secreting capacity, phenotypical stability, expression of cell surface markers involved in activation and homing processes or markers of the membrane rafts in correlation with the membrane cholesterol content, induction and characteristics of the calcium response, the protein tyrosine phosphorylation patterns before and after activation, and TCR recruitment into membrane rafts were investigated. Characteristic differences were found in most parameters among the TH cells of different effector phenotype. APC cell lines of B-cell and monocyte/macrophage origin were also characterized for their cell surface antigen expression in correlation with their functional features. A significant correlation was found between the raft marker membrane ganglioside (GM1, GM3) expression and the antigen presenting capacity or the phagocitic activity in macrophage cells. Cholesterol specific mouse monoclonal antibodies were generated to detect raft-associated and free cholesterol in the membrane. On the basis of our preliminary results these antibodies may also act directly as modulators of certain immune functions.