Kutatások a MALDI-TOF tömegspektrometria szénhidrátkémia alkalmazási lehetőségeinek kiszélesítésére = Investigation of widening of the MALDI-TOF MS applications in carbohydrate chemistry

摘要

A kutatás fő célkitűzése volt szénhidrátok és származékaik (védőcsoportokat tartalmazó vagy fehérjéhez kötött oligoszacharidok) MALDI-TOF tömegspektrometriás meghatározásához optimális kísérleti körülmények megállapítása és így a szénhidrátkémiai kutatások segítése. Ciklodextrin modellvegyületek alkalmazásával vizsgáltuk a minta előkészítés és felvitel valamint a kísérleti paraméterek változtatásának hatását a spektrumra. Tanulmányozzuk a mátrix anyagának, a minta koncentrációjának, a mintafelvitel módjának és a reflektron detektor érzékenység hatását a spektrum minőségére. Védőcsoportokat tartalmazó oligoszacharidok mérésekor számos törvényszerűséget figyeltünk meg a védőcsoportok stabilitása, a különböző mátrixok és kísérleti paraméterek között. A MALDI mérések segítették a termékek és melléktermékek azonosítását kémiai és enzimes oligoszacharid szintézisek esetében. Fragmentációs vizsgálatokkal kémiai és enzimatikus szintézissel előállított oligoszacharidok, valamint természetes eredetű amiláz inhibítorok szerkezet felderítését végeztük el. Meghatároztuk különböző neoglikoproteinek oligoszacharid tartalmát, amely meghatározó a sikeres immunválasz kiváltásában. Méréseinkkel támogattuk a különböző neoglikoprotein előállítási módszerek szisztematikus vizsgálatát. | The object of this research program was the application of MALDI-TOF MS in the field of carbohydrates and glycoconjugates. Cyclodextrins as model compounds were used to investigate the effect of the sample preparation methods and experimental parameters on the spectrum. The studied experimental parameters were: different matrix compounds, detector sensitivity, sample concentration and sample preparation methods. The stability of the protecting groups under the conditions of the evaporation/ionization was studied. The MALDI measurements assisted to identify products and byproducts of different chemical and enzymatic oligosaccharide syntheses (eg. sugar-sulfonates, sulfonic acid esters, PNP-glycosides and acarbose derivatives). Structural analysis and verification were made using post source decay fragmentation method in case of a tetrasaccharid component of N-glycanes, acarbose and its derivatives obtained by enzymatic synthesis and some natural alpha-amylase inhibitors. In addition we used this method for determination of molecular masses of neoglycoproteins.