Az Agrobacterium vitis agrocin termelését kódoló DNS szakasz izolálása, jellemzése és a termelt agrocin növénykórtani értékelése = Isolation and characterization of the DNA region of Agrobacterium vitis required for agrocin production and its plant pathological evaluation

摘要

Az Agrobacterium vitis agrocin termelését kódoló DNS szakasz izolálása, jellemzése és a termelt agrocin növénykórtani értékelése A jelen pályázatban az Agrobacterium vitis által előidézett szőlő-golyvásodás ellen használt biológiai védekezésre alkalmas F2/5-ös törzs agrocin termelésért felelős DNS szakaszát (38 kb) izoláltuk és értékeltük a termelt agrocin növénykórtani vonatkozásait. Transzpozon mutánsokat állítottunk elő és szekvenáltuk a transzpozon beépülési helye körüli DNS szakaszokat. A DNS szekvenciákból próbákat készítettünk és a baktérium génkönyvtárában génkönyvtárban megtaláltuk azt a génszakaszt amely kódolja az agrocin termelését. Az izolált klónok közül az egyik amely egy 38 kb inszertet tartalmaz képes volt a mutánsok eredeti agrocintermelését helyreállítani, igazolva, hogy a keresett gének ezen a szakaszon találhatók. Izoláltuk a termelt agrocint és meghatároztuk molekulasúlyát (>1000 kDa). Megállapítottuk, hogy a részlegesen tiszta agrocinnal szemben a növénykórokozó baktériumok közül csak az Agrobacterium vitis törzsek érzékenyek. A szőlőn a részlegesen tisztított agrocinnal megakadályozható a tumorképzés. | Isolation, characterization and plant pathological evaluation of the agrocin production of Agrobacterium vitis In this project, we investigated a non-pathogenic Agrobacterium vitis strain F2/5 used again the pathogenic strains of Agrobacterium vitis causing tumors on grapevine. We isolated and cloned a piece of DNA (38 kb) coding genes responsible for agrocin production of Agrobacterium vitis strain F2/5. The produced agrocin was characterized and evaluated from plant pathological aspects. Agrocin-minus mutants were made from the nontumorigenic strain F2/5 and sequenced the EcoRI fragment at the transposon insertion sites. On the bases of these sequences probes were constructed and used for the screening of a genomic library of F2/5. One clone from the library was able to restore the agrocin production in agrocin-minus mutants indicating that the insert in this clone contained the DNA piece responsible for the agrocin production. Biochemical isolation and purification of the agrocin revealed that the agrocin is a large protein molecule (M.W. >1000 kDa). It is heat and proteolitic enzymes sensitive. The partially purified agrocin was able to inhibit the tumor formation on grapevine.