Cytogenetic characterization of small supernumerary marker chromosomes : towards a genotype-phenotype correlation

摘要

Cromossomas marcadores supranumerários sSMCs, do inglês, small Supernumerary Marker Chromosomes) são pequenos cromossomas estruturalmente anormais que aparecem adicionalmente aos 46 cromossomas humanos e que não podem ser identificados ou caracterizados por citogenética convencional, tendo um tamanho inferior a um cromossoma 20 da mesma placa metafásica. Os sSMCs constituem um grupo heterógeneo de cromossomas anómalos que podem ter diferentes formas, como cromossomas duplicados invertidos (inv dup), cromossomas minute cêntricos (min) e cromossomas em anel (r). O risco de alterações fenotípicas associadas à presença de um sSMC depende de vários factores, como a hereditariedade, a origem do cromossoma, a morfologia, o conteúdogenético, a presença de dissomia uniparental ou o grau de mosaicismo. De facto, os fenótipos associados a um sSMC são variáveis, desde normais a severamente afectados.Os sSMCs podem ser detectados em diagnóstico pós-natal ou em pré-natal constituindo, sobretudo no último caso, um problema complexo para a investigação citogenética e o aconselhamento genético. Tendo em conta dados publicados naliteratura que estimam uma frequência de 0.044% recém-nascidos portadores de um sSMC e que a população mundial é estimada actualmente em cerca de 6 823 000 000 pessoas, pode-se extrapolar o número de aproximadamente 3 milhões de indíviduosno mundo portadores de um sSMC. A grande maioria destes indíviduos não tem manifestações fenotípicas aparentes, no entanto cerca de 26% dos casos de indivíduos com um sSMC terão manifestações fenotípicas que poderão ser mais ou menos severas.A maioria dos cromossomas marcadores publicados na literatura não têm uma caracterização citogenética detalhada, quer da origem quer do conteúdo genético, que permita uma correlação robusta com o fenótipo esperado. Este facto dificulta o aconselhamento genético quando é encontrado um sSMC, sobretudo em diagnóstico pré-natal. Neste domínio é essencial sistematizar o conhecimento sobre o conteúdo genético envolvido nos sSMC e a descriminação das manifestações fenotípicas expectáveis de um indivíduo ou grupo de indivíduos, sejam elas normais ou anormais.Com este trabalho pretendeu-se contribuir para esta sistematização, procedendo-se à caracterização por citogenética molecular de um grupo de cromossomas marcadores supranumerários derivados de vários cromossomas, nomeadamente dos cromossomas1, 2, 5, 11, 13, 15, 16, 17, 18 e 22. Pretendeu-se validar a técnica de hibridização Genómica Comparativa por array (array CGH, do inglês array Comparative Genomic Hybrydization) para caracterização da extensão genética do cromossoma marcador, após a sua microdissecção e amplificação. Concluiu-se que esta técnica será de grande utilidade para a correcta caracterização de sSMCs sobretudo quando o cromossoma marcador está presente em mosaico de baixa expressão. Após caracterização molecular do grupo de sSMC em estudo estabeleceu-se, na medida do possível, uma relação genótipo/fenótipo, comparando cada caso com outros casos reportados na literatura. Neste trabalho propõem-se ainda linhas de orientação para lidar com casos de sSMC num laboratório de diagnóstico em citogenética, tendo em consideração factores como por exemplo o tempo para a caracterização citogenética, o grau de mosaicismo e as técnicas disponíveis no laboratório. O trabalho incluído nestadissertação reforça e clarifica a necessidade de uma caracterização citogenética molecular detalhada de cromossomas marcadores supranumerários, recorrendo nomeadamente a técnicas de M-FISH e de array CGH. Esta caracterização possibilita oestabelecimento de relações genótipo/fenótipo cada vez mais precisas e essenciais para um correcto aconselhamento genético, por parte do Geneticista Clínico.