Nachweis der chromosomalen Instabilität beim kolorektalen Karzinom mittels Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (FISH) und Korrelation mit molekularen und klinisch-pathologischen Parametern

摘要

In dieser Arbeit wurden 50 kolorektale Karzinome zur Ermittlung der chromosomalen Instabilität mit Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (FISH) untersucht und die Ergebnisse mit klinisch-pathologischen und molekularen Parametern (MS-Status, Promotormethylierung von MLH1, p14, p15 und p16, Immunhistochemie von MLH1, MSH2 und MSH6, Maspin-IH, CIMP-Pathway und ß-catenin-Akkumulation) korreliert.udDie FISH wurde mittels drei Centromer- und einer Lokus-spezifischen Sonde durchgeführt (Red CEP3, Green CEP7, Aqua CEP17, p16 (9p21)). Über den Vergleich mit Normalgewebe wurde, unter Betrachtung der Einzelmarker CEP3, CEP7 und CEP17, festgelegt, ob ein Tumor eine chromosomale Instabilität zeigt und in welcher Ausprägung („CIN-negativ“, „CIN-low“ oder „CIN-high“). Das Tumorsuppressorgens p16 (9p21) wurde auf das Vorhandensein eines LOH und einer homozygoten Deletion untersucht.udEs ist gelungen mittels FISH bei kolorektalen Tumoren eine chromosomale Instabilität zu detektieren. Diese kann unterschiedlich stark ausgeprägt sein und bei der Korrelation mit dem MS-Status ergeben sich verschiedene Tumorgruppen.ududFasst man CIN-high und CIN-low als CIN-positiv zusammen und zählt man MSI-low zur Gruppe der MSS-Tumoren zeigen sich folgende prozentualen Verteilungen: CIN-positiv/MSI-negativ (50% bzw. 54%), CIN-negativ/MSI-positiv (22% bzw. 18%), CIN-positiv/MSI-positiv (22% bzw. 26%) und CIN-negativ/MSI-negativ (6% bzw. 2%).ud„CIN-negativ“ korreliert mit MSI-high, „CIN-high“ mit MSS und „CIN-low“ nimmt eine Mittelstellung ein, mit einem Überwiegen von MSI-Tumoren. udAllerdings sind nur knapp über die Hälfte der „CIN-high“-Fälle MSS (13 von 23=56,52 % bzw. 15 von 28=53, 57%), die restlichen verteilen sich auf die MSI-low- und MSI-high-Gruppe.udWir fanden in 6% bzw. 12% eine Gruppe von Tumoren, die sowohl eine chromosomale Instabilität (CIN-high) als auch eine Mikrosatelliteninstabiliät (MSI-high) zeigt. Vice versa gibt es eine kleinere Gruppe von 6% bzw. 2% mit weder CIN noch MSI. ududBei der Korrelation mit den klinisch-pathologischen Parametern zeigte sich, dass „CIN-high“-Tumoren einen höheren Differenzierungsgrad (G2) hatten, während MSI-high-Tumoren häufiger ein G3-Grading zeigten und meist im proximalen Kolon lokalisiert waren.udBei „CIN-high“-Tumoren lagen häufiger LOHs sowohl bei den MS-Einzelmarkern als auch beim Tumorsuppressorgen p16(9p21) vor.ud„CIN-high“-Tumoren zeigten eine positive immunhistochemische MLH1-Expression und häufiger keine Promotorhypermethylierung, während MSI-high positiv mit einer MLH1- und p16-Promotormethylierung und einer negativen immunhistochemischen Expression von MLH1 korrelierte.udWeiterhin zeigten CIN-Tumoren den Trend unabhängig vom CIMP-Pathway vorzukommen und CIMP-positiv korrelierte mit MSI-high.ud