DNA flow cytometric evaluation of spermatogenesis. Part 1: Analysis of nuclear DNA in cells from the human testicular tissue

摘要

ヒト睾丸組織内DNA量分布をflow cytometryを用い測定するための試料作成法を検討した.1)ヒト睾丸組織は,0.05%collagenase中で37°C 60分間処理で,遊離細胞にすることができた.2)遊離細胞を固定しないで処理するKrishan法は,ヒト睾丸組織の試料作成法としては不適当であった.3)遊離細胞を70%エタノール固定後,RNase, pepsin処理し,PIで蛍光染色,flow cytometryを用いDNA量を測定すると,良好なヒストグラムを得た.4) Pepsin処理でcell aggregation, cell debrisは著明に減少し,ヒストグラムが良好となったが,RNase処理はヒストグラムに特徴的変化を示さなかった.5) DNAヒストグラムを解析して,睾丸組織内のspermを除いたhaploid, diploid, tetraploidの細胞比率を短時間に,正確に測定できた.以上より,ヒト睾丸組織を適切な試料作成法を用い処理し,flow cytometryでDNA量分布を測定すると,精子形成能の定量的評価となりうる可能性を示唆した