Localización subcelular e interacciones moleculares de la proteína 2b del virus del mosaico del pepino: su relevancia en la función supresora de silenciamiento génico

摘要

El silenciamiento génico es una importante resistencia de las plantas frente a los virus que limita su acumulación y su dispersión a nivel celular, local y sistémico. Los virus vegetales han desarrollado proteínas con actividad supresora del silenciamiento de RNA que pueden interferir con esta defensa en diferentes puntos; algunos supresores virales unen y secuestran directamente los RNAs pequeños (small RNAS, sRNAs) que dirigen el silenciamiento hacia dianas específicas previniendo su incorporación a los complejos de silenciamiento inducido por RNA (RNA-induced silencing complex, RISCs) y su acción degradadora de RNAs virales de secuencia complementaria, mientras que otros interaccionan con componentes proteicos de la maquinaria de silenciamiento inhibiendo su función o degradándolos. En algunos casos un mismo supresor puede actuar de ambas maneras. El Virus del mosaico del pepino (Cucumber mosaic virus, CMV) es un virus de RNA ampliamente distribuido que causa importantes pérdidas en especies agrícolas y ornamentales. Se han diferenciado diferentes clados filogenéticos según la secuencia del gen 2b que codifica la proteína 2b: los subgrupos IA y IB causan síntomas severos en plantas mientras que en el subgrupo II son más leves. La proteína 2b tiene función supresora de silenciamiento y es un conocido determinante de patogenicidad de este virus. Con anterioridad a este trabajo varios grupos de investigación habían postulado que la actividad supresora de silenciamiento de esta proteína requería de su localización nuclear (Lucy et al. 2000. EMBO 19, 1672), de su interacción con determinadas proteínas argonauta (AGO1: Zhang et al. 2006b. Genes & Dev. 20, 3255) o de su unión a sRNAs (Goto et al. 2007. Plant Cell Physiol. 48, 1050). El trabajo que se presenta en esta tesis doctoral ha pretendido contribuir a determinar la importancia relativa que tienen en la supresión del silenciamiento antiviral la localización subcelular nuclear, y sus interacciones con factores de la maquinaria del silenciamiento antiviral (proteínas AGO o RNAs pequeños de secuencia viral) de la proteína 2b de la cepa Fny del subgrupo IA de CMV...