Klonierung und Charakterisierung eines Phagenlysins und sein Einsatz zur diagnostischen Erkennung von Bacillus anthracis

摘要

Das Ziel der vorliegenden Arbeit war die Entwicklung und Evaluierung eines neuen Testverfahrens zur diagnostischen Erkennung von B. anthracis. Der Test sollte auf der erregerspezifischen Lyse durch das Bakteriophagen-kodierte Enzym PlyG beruhen. Er sollte einerseits unter einfachen Bedingungen ohne aufwändigen Geräteeinsatz durchzuführen und andererseits leicht zu standardisieren und zu beurteilen sein. Ferner sollte geprüft werden, ob PlyG zur Präparation von DNA aus vegetativen Zellen und Sporen von B. anthracis geeignet ist. Zur Evaluierung der Tests bzw. Methoden wurden 108 B. anthracis-Isolate und 200 Isolate anderer Bacillus spp. aus der Stammsammlung des Instituts für Umwelt- und Tierhygiene der Universität Hohenheim verwendet.Im Zuge der hier durchgeführten Arbeiten konnte ein neues Diagnostikum entwickelt werden, das sich gut in die Palette der vorhandenen Tests zur Identifizierung von B. anthracis-Isolaten einfügt. Da der Test hochgradig spezifisch und sensitiv ist und sich mit wenig Aufwand durchführen lässt, kann dieser Test zu einer Verbesserung der Milzbrand-Schnelldiagnostik vor allem in weniger gut ausgestatteten Labors beitragen. Seine einfache und leicht zu standardisierende Durchführung bieten in Kombination mit der Stabilität des rPlyGs vor allem gegenüber dem gamma-Phagentest anwendungstechnische Vorteile.