Nouvelle stratégie de ciblage de la GTPase RhoB : développement d'intracorps conformationnels sélectifs et leur fonctionnalisation en tant qu'inhibiteurs intracellulaires de l'activité de RhoB

摘要

La GTPase RhoB partage 85% d'homologie avec RhoA et RhoC. Ces protéines alternent entre deux conformations : une active liée au GTP et une inactive liée au GDP. Des dérégulations de leur expression et de leur activation sont retrouvées dans de nombreux cancers. A ce jour, aucun inhibiteur sélectif de ces GTPases n'a pu être développé afin de bloquer l'activité de l'une ou l'autre de ces Rho. Ce travail doctoral a permis de mettre au point une approche innovante ciblant sélectivement l'état activé de la protéine RhoB. Suite à la caractérisation d'une nouvelle banque d'anticorps à simple domaine, sa validation par phage display contre divers antigènes a fourni de nombreux anticorps de haute fonctionnalité dans plusieurs applications. L'établissement d'une stratégie de sélection directe d'anticorps intracellulaire (intracorps) dirigés contre RhoB a permis d'identifier plusieurs intracorps conformationnels de la forme active de RhoB, dont un discriminant RhoB de ses homologues RhoA et RhoC. La fonctionnalisation d'intracorps par un domaine Fbox conduisant une dégradation de la cible a ensuite fourni la première stratégie efficace d'inhibition sélective de l'activité de RhoB. Ces travaux ont notamment démontré que l'extinction de l'activité de RhoB par intracorps fonctionnalisé augmente la migration et l'invasion de cellules pulmonaires. Ainsi cette avancée permettra de déterminer si l'activité de RhoB peut être une nouvelle cible thérapeutique et ouvre de nouvelles perspectives d'étude fine de l'activité des GTPases.