Comparison of Four Lymphocyte Isolation Methods and Two Hemolysis Methods for Immuno Flow Cytometric Analysis of Peripheral Lymphocyte Subsets in Rhesus Monkeys (Macaca mulatta)

摘要

サル類の末梢血リンパ球サブセットを解析する際のリンパ球分離法の妥当性を明らかにする目的で，Ficollを用いた比重遠心法，染色前後に溶血処理をおこなう2種類の全血法，dextran処理と比重遠心法との併用法の計4法を用いてアカゲザルのリンパ球分離を行い，末梢血リンパ球サブセットレベル，赤血球の残存率およびリンパ球回収率を比較した。得られた結果は以下のとおりである。1．4種の主要リンパ球サブセットレベルには比重遠心法と溶血後に染色する全血法Ａとの間に差は認められなかった。このことから，ヒトで報告されている比重遠心操作の過程での特定のサブセットの消失は生じないと判断され，比重1.077の分離剤を用いた比重遠心法はアカゲザルに適応可能と考えられる。2．染色後に溶血処理を行う全血法ＢではLeu-lla抗体で検出されるCD16抗原陽性細胞がほとんど検出されなかった。原因として，染色時に血漿中のIgGによるFcγレセプターのブロックが生じた可能性が考えられ，Leu-lla抗体を用いる場合は，抗体反応前に血球を洗浄する必要がある。3．Dextran処理と比重遠心の併用法はリンパ球分画への赤血球の混在を効果的に防止するが，リンパ球の回収率は低下した。しかしながら，特定のサブセットが低下することがないことから，アカゲザルのリンパ球分離法としては有効な方法である。4．NH_4Clを基剤とする溶血剤を用いた溶血処理は，蒸留水による溶血処理に比べてリンパ球回収率が高く，安定して良好な溶血が行える処置と判断される。