Ontwikkeling van een confirmatiemethode voor de detectie van recombinant bovine somatotropine in serum van melkvee.

摘要

SAMENVATTING.Door recombinant somatotropine (rbST) aan melkvee toe te dienen kan de melkproductie verhoogd worden. Dit is in verschillende landen toegestaan waaronder de USA, maar verboden in de Europese Unie. Om rbST misbruik aan te kunnen tonen zijn methoden voor de bevestiging van positieve screeningsresultaten nodig. Deze bevestiging van rbST is een uitdaging vanwege de overeenkomst met het endogene hormoon (bST), de lage rbST concentraties die na toediening in het bloed circuleren, de korte halfwaarde tijd en daarnaast signaal suppressie in de LC-MS/MS door storende eiwitten afkomstig van de complexe serum matrix. Om rbST met de benodigde gevoeligheid direct in serum te kunnen meten, zal daarom het monster volume groot moeten zijn. Om rbST gebruik te kunnen bevestigen wordt, in dit rapport, een nieuwe voorbewerkingsmethode voor serum gepresenteerd. Voorafgaand aan LC-MS/MS wordt een, op magnetische beads gebaseerde immunoaffiniteits stap uitgevoerd om rbST uit het monster te binden en te concentreren. Na binding van het rbST aan de magnetische beads, wordt de serum matrix en de daarmee storende eiwitten verwijderd. Het rbST wordt vervolgens van de magnetische beads geëlueerd waarna confirmatie met LC-MS/MS plaats kan vinden. Deze nieuwe methode maakt het mogelijk om concentraties lager dan, de voor effectieve controle benodigde, 10 ng mL-1 te meten. Deze nieuwe methode is toegepast op een selectie van serum monsters van een met rbST behandelde koe, en de verkregen resultaten worden in dit rapport gepresenteerd. Deze data laten zien dat het met deze nieuwe methode mogelijk is om rbST in behandelde koeien vanaf de 6e dag na behandeling te meten.