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Studies of Structurally Novel Neuropeptides in Immunocytes---Purification, Gene Expression, and Structural and Functional Analyses of Crustacean Hyperglycemic Hormone-Like Molecules

机译:免疫细胞中结构新颖的神经肽的研究---甲壳类高血糖激素样分子的纯化,基因表达以及结构和功能分析

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摘要

[[abstract]]先前的研究發現甲殼類升血糖荷爾蒙 (Crustacean hyperglycemic hormone,CHH) 有分子多形態。被發現於X-器官/血竇腺 (X-organ/sinus gland,XOSG) 的兩個 SG-CHH 之間的差異僅在於第三個胺基酸之構象 (L-苯丙胺酸或 D-苯丙胺酸);這兩個 SG-CHH 在功能上有調節強度的差異。在其他神經內分泌組織 (胸神經節或圍心器官) 發現的 CHHs (TG-CHH 或 PO-CHH) 與 SG-CHH 之差異在於分子序列的 C-端區域;此差異造成 TG-CHH 、PO-CHH 與 SG-CHH 之功能分歧。本實驗室最近的免疫分析首次顯示,甲殼類免疫細胞 (血球細胞) 具有類 CHH 分子;分子選殖所得的cDNA 序列顯示血球表現的 CHH (Hem-CHH) 只有典型 CHH 的 N-端 40 個胺基酸殘基。因此 Hem-CHH 是中斷型 CHH,為一結構新穎的 CHH 家族新成員。本計畫主要目的是瞭解 Hem-CHH 基因結構、Hem-CHH 在不同類型血球細胞與神經內分泌組織之表現分佈模式,以及分析 Hem-CHH 之功能與結構。第一年計畫中,我們將選殖 Hem-CHH 基因,瞭解其外顯子/內顯子組成;利用反轉錄-聚合.連鎖反應或原位雜交偵測 Hem-CHH 在不同類型血球細胞與神經內分泌組織之表現。第二年計畫中,我們將使用高效能層析來分離血球萃取液,再利用專一性抗體來篩選層析分離之收集液;具免疫反應的收集液其所含物質之分子量及胺基酸序列再以質譜儀分析確認,並與 cDNA 預測之數值比對,以獲取純化 Hem-CH。並進一步分析純化 Hem-CHH之次級結構組成與雙硫鍵鍵結模式。此外,我們將測試 Hem-CHH之升血糖與抑制蛻殼功能 (此為SG-CHH已知的兩個生物活性)。第三年計畫中,我們將發展即時聚合.連鎖反應定量 Hem-CH mRNA,用來探討在免疫刺激物處理的動物,其 Hem-CHH 基因表現是否改變,以推估 Hem-CHH 可能參與免疫調節。。此外,我們將建立數種免疫調節功能分析,用來探討 Hem-CHH 可能的免疫調節功能。本計劃預期結果將有多方面的重要性。Hem-CHH 是 CHH 家族的新成員;之前發現的 CHH 家族成員都位於神經內分泌組織。Hem-CHH 表現於免疫細胞暗示 Hem-CHH 具有免疫調節功能。我們預期本計劃的結果將揭露甲殼類免疫調節的新層面。此外,與先前發現的 CHH 比較,Hem-CHH 具有獨特的初級結構,僅具有 40 個胺基酸殘基;其更高級結構與先前發現的 CHH應有顯著的差異。因此,本計劃功能與結構的分析將有助於瞭解不同 CHH分子其功能分化之結構基礎,以及CHH 分子多型態之生理意含等重要之課題。
机译:[[abstract]]先前的研究发现甲壳类升血糖荷尔蒙 (Crustacean hyperglycemic hormone,CHH) 有分子多形态。被发现于X-器官/血窦腺(X-organ/sinus gland,XOSG) 的两个SG-CHH 之间的差异仅在于第三个胺基酸之构象(L-苯丙胺酸或D-苯丙胺酸);这两个SG-CHH 在功能上有调节强度的差异。在其他神经内分泌组织(胸神经节或围心器官) 发现的CHHs (TG-CHH 或PO-CHH) 与SG-CHH 之差异在于分子序列的C-端区域;此差异造成TG-CHH 、PO- CHH 与SG-CHH 之功能分歧。本实验室最近的免疫分析首次显示,甲壳类免疫细胞(血球细胞) 具有类CHH 分子;分子选殖所得的cDNA 序列显示血球表现的CHH (Hem-CHH) 只有典型CHH 的N-端40 个胺基酸残基。因此 Hem-CHH 是中断型 CHH,为一结构新颖的 CHH 家族新成员。本计画主要目的是了解 Hem-CHH 基因结构、Hem-CHH 在不同类型血球细胞与神经内分泌组织之表现分布模式,以及分析 Hem-CHH 之功能与结构。第一年计画中,我们将选殖Hem-CHH 基因,了解其外显子/内显子组成;利用反转录-聚合.连锁反应或原位杂交侦测Hem-CHH 在不同类型血球细胞与神经内分泌组织之表现。第二年计画中,我们将使用高效能层析来分离血球萃取液,再利用专一性抗体来筛选层析分离之收集液;具免疫反应的收集液其所含物质之分子量及胺基酸序列再以质谱仪分析确认,并与cDNA 预测之数值比对,以获取纯化Hem-CH。并进一步分析纯化 Hem-CHH之次级结构组成与双硫键键结模式。此外,我们将测试 Hem-CHH之升血糖与抑制蜕壳功能 (此为SG-CHH已知的两个生物活性)。第三年计画中,我们将发展即时聚合.连锁反应定量Hem-CH mRNA,用来探讨在免疫刺激物处理的动物,其Hem-CHH 基因表现是否改变,以推估Hem-CHH 可能参与免疫调节。 。此外,我们将建立数种免疫调节功能分析,用来探讨 Hem-CHH 可能的免疫调节功能。本计划预期结果将有多方面的重要性。 Hem-CHH 是 CHH 家族的新成员;之前发现的 CHH 家族成员都位于神经内分泌组织。 Hem-CHH 表现于免疫细胞暗示 Hem-CHH 具有免疫调节功能。我们预期本计划的结果将揭露甲壳类免疫调节的新层面。此外,与先前发现的 CHH 比较,Hem-CHH 具有独特的初级结构,仅具有 40 个胺基酸残基;其更高级结构与先前发现的 CHH应有显著的差异。因此,本计划功能与结构的分析将有助于了解不同 CHH分子其功能分化之结构基础,以及CHH 分子多型态之生理意含等重要之课题。

著录项

  • 作者

    李奇英;

  • 作者单位
  • 年度 2012
  • 总页数
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 zh_TW
  • 中图分类

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