Identification de microARNs associés à la tolérance au froid : caractérisation de miR156 et sa cible, la famille de gènes Squamosa Promoter binding protein-Like (SPL), chez le blé

摘要

Les basses températures représentent un des facteurs environnementaux limitant la croissance et la productivité des plantes céréalières. Plusieurs microARNs ciblant potentiellement des gènes codant pour des facteurs de transcription et protéines majeures associés à la tolérance au froid ont été identifiés chez le blé d'hiver. Leur faible abondance nous a forcée à optimiser le buvardage northern des microARNs en utilisant le 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide pour fixer l'ARN à la membrane et ainsi augmenter la sensibilité de la méthode d'analyse. Cette optimisation n'a pas été suffisante pour nous permettre de confirmer la présence des microARNs associés à la tolérance au froid mais nous a permis de détecter miR156, un microARN associé à la floraison chez la plante modèle Arabidopsis thaliana. miR156 est conservé chez les plantes et cible la famille de facteurs de transcription Squamosa Promoter binding protein-Like (SPL). Nous avons identifié deux gènes SPL présent chez le blé, TaSPL3 et TaSPL13, et avons confirmé la présence d'une séquence de régulation par miR156 sur chacun, dans la région codante et 3'UTR respectivement, suggérant leur régulation post transcriptionelle par miR156. L'analyse des régions promotrices de TaSPL3 et TaSPL13 a révélé des motifs de régulation cis associés à une régulation par les facteurs de transcription MYB, MYC, WRKY, CBF et MADS. Nous avons analysé, par buvardage northern, l'expression de miR156, TaSPL3 et TaSPL13 lors d'un traitement au froid de 49 jours. L'expression de miR156 diminue lors du traitement au froid alors que celle de TaSPL3 et TaSPL13 est à son maximum après 28 jours à 4°C. Nos résultats suggèrent que miR156 et sa cible, les facteurs de transcription SPL, pourraient être impliqués dans le processus de réponse au froid induisant la transition florale du blé d'hiver.ud______________________________________________________________________________ udMOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : microARN, Squamosa Promoter binding protein-Like, blé, froid, floraison.