Système de défense de l'étoile de mer boréale, Leptasterias polaris, en présence du tributylétain

摘要

Le tributylétain (TBT), présent dans les peintures antisalissures de bateaux, est reconnu pourudêtre un composé très toxique: induction de l'imposex chez les gastéropodes, mortalité desudlarves d'invertébrés, perturbateur endocrinien, génotoxique et neurotoxique. Nous nousudsommes intéressés à son caractère cytotoxique et immunotoxique sur l'étoile de mer polaire,udLeptasterias polaris, une espèce qui semble peu sensible au TBT in vivo comme in vitro. Leudsystème de défense immunitaire des échinodermes peut être comparé au système inné desudvertébrés supérieurs. Les étoiles de mer n'ont qu'un seul type de cellule immunitaire, lesudamoebocytes, qui représentent plus de 95 % de la population cellulaire de leur liquideudcoelomique. Cette cellule a, entre autre, la fonction d'effectuer phagocytose, principaleudactivité immunitaire des étoiles de mer. Notre objectif était d'étudier le comportement in vitrouddes cellules immunitaires de l'étoile de mer L. polaris en présence de TBT, en comparantudplusieurs méthodes de mesures. Pour l'étude de la cytotoxicité, la viabilité des amoebocytes audété évaluée après une exposition au TBT de 3 h in vitro à l'obscurité (12°C) selon deuxudméthodes: (1) la fluorescence en microplaque et (2) la coloration au bleu trypan enudmicroscopie. Même si les deux méthodes suggèrent une différence dans l' intensité de laudréponse cellulaire au TBT, les concentrations d'exposition sont très fortes pour atteindre laudLC50 (jusqu'à 5,8 J..lM). Ces cellules sont considérées comme très résistantes par rapport àudd'autres cellules du même type chez les invertébrés et les vertébrés. Pour l'étude deudl'immunotoxicité, la capacité d'effectuer la phagocytose a été évaluée après une expositionudau TBT de 3 h in vitro à l'obscurité (12°C) selon deux méthodes en fluorescence: (1) auudlecteur de microplaque et (2) au cytomètre en flux. La première méthode a été mise de côté àudcause des résultats très variables obtenus. La deuxième méthode est davantage reproductible.udCette méthode de cytométrie en flux nous a permis de travailler avec deux fractionsudcellulaires. La deuxième fraction est une fraction plus adhérente car il faut la décollerudchimiquement pour la récupérer alors que la première fraction se décolle mécaniquement. Cesudcellules présentent dans la fraction sont plus actives et ne semblent pas perturbées par uneudexposition de 4 J..lM au TBT. Nous observons plutôt que les étoiles de mer réagissent trèsuddifféremment l'une de l'autre. Les cellules de la deuxième fraction, moins actives, sont plusudsensibles et une exposition à 4 ~M de TBT provoque une diminution de la phagocytose. Afinudde mieux comprendre les mécanismes de toxicité du TBT, des expériences ont été effectuéesudau cytomètre en flux pour vérifier l'hypothèse de la pénétration du TBT à l' intérieur de laudcellule. Les résultats indiquent que le TBT pénètre peu ou pas du tout quelque soit le temps etudles concentrations utilisées, laissant penser que la membrane cytoplasmique des amoebocytesudpeut limiter le transport du TBT vers le cytoplasme et les composantes subcellulaires.