The Acetylation of Thymosin α1 is Independent on RimL in Escherichia coli

摘要

目的:考察大肠杆菌乙酰转移酶rIMl对胸腺素α1(Tα1)乙酰化修饰的影响。方法:构建含500bP同源臂的卡那抗性基因打靶片段,利用rEd同源重组系统,使大肠杆菌bl21(dE3)的rIMl基因插入失活,随后导入质粒PCP20去除抗性基因,构建突变菌株rIMl-bl21(dE3);将重组质粒PET-Tα1-l12分别转入出发菌株和突变菌株中进行表达,经固定金属离子亲和层析和反向高效液相层析后,将所得纯品进行质谱分析,精确测定相对分子质量。结果:PCr鉴定结果证明成功敲除rIMl基因;质谱结果表明,rIMl基因敲除菌中所表达的Tα1-l12融合蛋白与出发菌株一样,均有部分乙酰化修饰。结论:Tα1的乙酰化修饰并不依赖于rIMl。