合浦珠母贝碱性磷酸酶的分离纯化和性质研究

摘要

以合浦珠母贝（PinctadaFucata）的外套膜和内脏团为提酶材料，经Tris-HCl缓冲液（pH8.9）抽提，正丁醇处理，硫酸铵分级分离获得粗酶制剂，进一步经过SephadexG-150凝胶过滤柱层析，DEAE-32离子交换柱层析等纯化，获得电泳和层析单一纯的碱性磷酸酶制剂，比活力达8723unit/mg。测定酶的分子量为85.5kD，是由两个分子量为43kD的相同的亚基组成。 该酶对底物pNPP的水解反应的最适温度是45°C，最适pH为9.72，活化能为20.14kJ·mol-1，初速度为6.1mmol·L－1·min－1。米氏常数Km为2.86mmpl/L，最大反应速度Vm为9.0...