PCR real time con sonde fluorescenti 'DUAL FRET' per il controllo delle mastiti causte da microorganismi del genere Pseudomonas in allevamenti ovini

摘要

La mungitrice meccanica, nell'allevamento da latte bovino e ovino, se non utilizzata correttamente può talvolta favorire la comparsa di infezioni, come l'insorgenza e la diffusione di mastiti da germi ambientali quali Pseudomonas. Infatti gli impianti di mungitura meccanica, pur avendo reso il lavoro dell'allevatore meno faticoso, risultano sicuri ed affidabili solo se installati ed utilizzati correttamente, in termini di tecniche di mungitura, manutenzione e pulizia dell'impianto. Nella predisposizione di un protocollo per la prevenzione ed il controllo della mastite da Pseudomonas, che consideri gli aspetti gestionali e strutturali dell'allevamento, è stato progettato e validate un approccio diagnostico basato su una sonda oligonucleotidica bi-funzionale (DUAL-FRET) in grado di esprimere la massa di Pseudomonas spp. in rapporto a quella del biofilm presente nel campione esaminato. La metodica è stata validata analizzando i prelievi in parallelo con metodica tradizionale colturale. Analizzandoprelievi ambientali e campioni di latte provenienti da animali clinicamente sani e con mastite, i dati suggeriscono una correlazione positiva tra stato clinico della mammella, carica batterica totale e titolo di Pseudomonas spp., mentre il valore CCS nonera associato allo stato dell'infezione, in particolare per i campioni negativi. I risultati dimostrano che il saggio Dual-Fret rappresenta una procedura accurata e rapida (30 minuti per rilevare e quantificare i biofilm sostenuti da Pseudomonas spp.).