Zastosowanie testu RT-PCR do wykrywania obecnosci wirusa zapalenia tetnic koni w nasieniu ogierów

摘要

Wirusowe zapalenie tetnic koni jest jedna z najwazniejszych chorób zakaznych koniowatych. Choroba ta wystepuje powszechnie na calym swiecie, powodujac powazne straty ekonomiczne w hodowli koni (5, 8-10). Czynnikiem etiologicznym choroby jest wirus EAV (eauine arteritis virus) nalezacy do rodziny Arteriviridae. Material genetyczny wirusa stanowi jednoniciowy RNA o dodatniej polarnosci. Genom wirusa ma dlugosc okolo 12,7 tysiecy par zasad i zawiera 8 otwartych ramek odczytu (ORF), które koduja bialkastrukturalne i niestrukturalne wirusa (2, 4, 7). Ostra postac wirusowego zapalenia tetnic koni przebiega z objawami goraczki, oslabienia, utraty apetytu, zapalenia spojówek, wycieku z nosa, obrzeków powiek, podbrzusza, konczyn, moszny i napletka. U klaczy ciezarnych moze dochodzic do resorpcji plodów i poronien. W rozprzestrzenianiu zakazen wirusem EAV zasadnicze znaczenie odgrywaj a ogiery (14). Stwierdzono, ze u 30-60% ogierów po przejsciu zakazenia EAV dochodzi do ustanowienia zakazenia trwalego. Ogiery takie staja sie siewcami wirusa i stale wydalaja go z nasieniem. Okres siewstwa wirusa moze trwac od kilku tygodni do kilku lat, a w niektórych przypadkach nawet do konca zycia ogiera. Uzycie ogiera trwale zakazonego wirusem EAV do krycia klaczy lub jego nasienia do inseminacji powoduje rozprzestrzenienie zakazenia w populacji koni. Z tego powodu identyfikacja ogierów siewców wirusa ma zasadnicze znaczenie dla kontroli choroby. Do wykrywania obecnosci wirusa EAV w nasieniu stosowany jest glównie test izolacji wirusa w hodowli komórkowej. Procedura testu jest jednak czasochlonna, gdyz wynik uzyskuje sie z reguly po 2-3 tygodniach od dnia dostarczenia próbki do badan. Ponadto nasienie jest toksyczne dla hodowli komórek, co dodatkowo utrudnia odczyt testu. W ostatnich latach w diagnostyce wirusowego zapalenia tetnic koni coraz czesciej stosowana jest technika RT-PCR, która charakteryzuje sie wysoka czuloscia i umozliwia uzyskiwanie wyniku w znacznie krótszym czasie (6, 11, 12).