Получение микродисперсного тканеспецифического децеллюляризованного матрикса из суставного хряща свиньи

摘要

Разработан способ получения микродисперсного тканеспецифического матрикса из децеллюляризованного суставного хряща свиньи с сохранением морфофункциональных свойств внеклеточного матрикса и без признаков цитотоксичности. Распределение частиц хряща после криопомола по размерам в суспензии определяли с помощью лазерного дифракционного анализа. Диапазон размеров полученных микродисперсных частиц хряща указывает на возможность их инъекционного введения (< 220 мкм). Комбинация этапов, включающая 3 цикла замораживания/ог гзивания (-196 °С/37 °С) с последующей обработкой растворами поверхностно-активных веществ (ПАВ), додецилсульфата натрия и Тритона Х-100, и ДНКазой, позволила добиться полного отсутствия не децеллюляризованных микрочастиц. Остаточное содержание ДНК составило 9,11 +- 1,13 нг/мг ткани. Эффективность отмывки от ПАЗ оценивали по цитотоксичности матрикса на культуре мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека (МСК ЖТч). Для анализа гемосовместимости полученных образцов исследовали in vitro их гемолитическую активность. Адгезию и пролиферацию МСК ЖТч на поверхности матрикса исследовали на 21 сутки культивирования. Матрикс не обладал гемолитической активностью и цитотоксичностью относительно МСК ЖТч. В образцах наблюдали активную пролиферацию МСКЖТч на поверхности матрикса. Биосовместимость и гвмосовместимость полученного матрикса in vitro указывает на его потенциал в использовании в регенеративной медицине хряща.