ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК МЫШИ С НОКАУТОМ ПО ГЕНУ Pcbpl

摘要

КН-доменные PolyC-связывающие белки выполняют множество функций: от регуляции транскрипции до альтернативного сплайсинга. Существуют свидетельства важной роли этих белков в эмбриогенезе и в эмбриональных стволовых клетках (ЭСК). ЭСК являются культивируемыми аналогами клеток эпибласта до имплантации и находятся в состоянии так называемой наивной плюрипотентности. Ранее нами было показано, что представители этого семейства белков — hnRNP-K, Pcbpl и Pcbp2 — способны связываться с PolyC-сайтами регуляторных элементов гена Pou5fl, кодирующего ключевой для плюрипотентности фактор Oct4. Кроме того, в литературе представлены данные о раннем летальном фенотипе Pcbpl~(-/-) эмбрионов мыши. Для исследования роли Pcbpl в ЭСК нами были получены ЭСК с нокаутом по гену Pcbpl. В отличие от показанного нами ранее летального фенотипа hnRNР-К-дефицитных ЭСК, Pcbpl~(-/-) ЭСК оказались жизнеспособны, продолжали экспрессировать фактор Oct4 и, в целом, сохраняли плюрипотентные свойства. Полученные результатыговорят о том, что Pcbpl не нужен ни для регуляции экспрессии Oct4, ни для поддержания состояния наивной плюрипотентности. В последующих исследованиях будет проанализирована роль Pcbpl в процессах перехода клеток в состояние праймированной плюрипотентности, а также дальнейшего выхода из него путем дифференцировки в клетки трех зародышевых листков.