КЛОНИРОВАНИЕ КРУПНЫХ НЕНДЕАЛШЫХ ПАЛИНДРОМОВ В КОЛЬЦЕВОМ И ЛИНЕЙНОМ ВЕКТОРАХ

摘要

Проведено сравнительное исследование клонирования крупных неидеальных искусственных и природного палиндромов в кольцевом векторе pUC19и линейном векторе pN15L, сконструированном на основе мини-репликона умеренного бактериофага № 15. Искусственные палиндромы состояли из двухфрагментов ДНК фага лямбда длиной по 5.5 тпн, ориентированных "голова к голове" и разделенных коротким участком варьирующей длины. В качестве природного палиндрома использован ВапгШ. фрагмент длиной 12.5 тпн кластера генов рибосо'мной ДНК T.etrahymena pyriformis, Часть искусственных палиндромов и природный палиндром при включении в кольцевой вектор резко снижают его копийность. Высказывается предположение, что это являетсяследствием формирования крестообразных форм палиндрома, чему способствует сверхспирализация ДНК кольцевого вектора. Все эти палиндромыуспешно клонировались в линейном векторе, Таким образом, линейный вектор является предпочтительным при клонировании ДНК с инвертированными повторами.