КОНТРОЛЬ БИОСИНТЕЗА ПУРИНОВ У ДРОЖЖЕЙ Pichia methanolica ИДЕНТИФИКАЦИЯ БИФУНКЦИОНАЛЬНОГО ГЕНА ADE7,4, КОНТРОЛИРЩЕГО АКТИВНОСН GAR-СИНГЕТАЗЫ И АШ-СИ

摘要

Исследована коллекция индуцированных и спонтанных мутантов adc4, ade7 и ade4 ade7 дрожжей Pichia methanolica. С помощью биохимических и генетических методов показано, что локус ADE7,4 является сложным структурным геном, контролирующим 2-й (Е2) и 5-й (Е5) этапы биосинтеза пури-новых нуклеотидов (БПН) de novo. Установлено, что домен ADE4 детерминирует фосфорибозила-миноимидазоп-синтетазу, или AIRS (E5), а домен ADE7 - фосфорибозилглицинамид-синтетазу, или GARS (E2). Генетические свойства этого локуса, такие, как контроль двух ферментативных активностей, наличие двух доменов, а также способность к межаллельной комплементации (МАК) у мутантов по домену ADE4, детерминирующему AIR-синтетазную активность, - идентичны свойствам гомологичных генов (ADE5I7 и adel) у таксономически далеких видов Saccharomyces cerevisiae и Schizosaccharomyces pombe. Проведенная идентификация послужила основой для клонирования последовательности ADE7, 4рт из библиотеки генов P. methanolica, сконструированной на векторе YEpl3. Клонирование осуществлено в реципиенте S, cerevisiae по комплементации мутации ade7. Соответствие клонированного гена подтверждено трансформацией мутантов ade4, ade7 и ade7,4 дрожжей P. methanolica.