ВЫДЕЛЕНИЕ И ПЕРВИЧНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МУТАНТОВ ПО БИОГЕНЕЗУ ПЕРОКСИСОМ У МЕТИЛОТРОФНЫХ ДРОЖЖЕЙ Hansenula polymorpha

摘要

В результате обработки клеток метилотрофных дрожжей Hansenula polymorpha HF246 leul-1 N-нитро-М-нитрозогуанндином получена коллекция из 227 мутантов, неспособных расти на метаноле при повышенной температуре (45°С). Выявлено 94 ts-мутанта. не растущих на метаноле только при 45°С. но растущих при оптимальной температуре (37°С). что составило 35% от их общего количества. Комллементационный анализ с использованием 12 делеционных мутантов(имевшихся у данного вида дрожжей к моменту начала работы) по генам биогенеза пероксисом (РЕХ) позволил выделить в отдельную группу 51 мутант (в том числе 16 - ts). не комплементирующий делеционные мутанты с дефектами по восьми РЕХ-генам. Эти мутанты разделены на три группы: первую составили 10 (из них 4 - ts) pex10-мутантов; вторую - 19 мутантов, не комплементирующих другие тестеры рех: 1 -pexl; 2 - реx4 (1- ts); 6 - реx5 (5 - ts): 3 - реx8: 1 - рех 13:6 (3 - ts) - рех 19: третью группу составили 22 "множественных" мутанта. У мутантов третьей группы гибриды с несколькими тестерами не растут на метаноле. Все мутанты (51) несли рецессивные мутации, за исключением мутанта № 108. у которого мутация была доминантной лишь при 30°С (т.е. cs-доминантность). Рекомбпнационный анализ мутантов второй группы показал, что только пять мутантов (2-реx5 и 3 - реx8) несут мутации по соответствующимРЕХ-генам. у остальных 14 мутантов наблюдается выщепление сегреган-тов. растущих на метаноле, в случайной выборке от гибридов с pex-тестером.что свидетельствует о локализации мутации в других генах. Анализ случайной выборки аскоспор гибридов от скрещивания мутантов третьей группы со штаммом, не имеющим пероксисомных нарушений (ade11). у 19 из них указывает на одиночную мутацию, вызывающую множественный фенотип. При более детальном изучении двух мутантов этой группы была установлена локализация мутации в единственном РЕХ-гене (РЕХ1 или РЕХ2). Обнаруженный факт нарушения комплементацнонных взаимодействий неаллельных генов обсуждается.