МЕТИЛНИТРОЗОМОЧЕВИНА CHALLENGE-МУТАГЕН В ОЦЕНКЕ АКТИВНОСТИ КОРРЕКЦИОННОЙ РЕПАРАЦИИ ДНК (MMR): СВЯЗЬ С НЕКОТОРЫМИ ВИДАМИ РАКА

摘要

Тотальная репарационная способность - широко распространенный фенотипический маркер предрасположенности к раку. Оценка этого показателя предполагает использование в клеточной системе m vitro challenge-мутагена, позволяющего проявить латентную генетическую нестабильность и репаративную недостаточность в тестируемых клетках. Традиционно в таких исследованиях используются два показателя - оценка мутагенной чувствительности (хромосомные аберрации) и ге-нотоксический эффект (метод ДНК-комет). Цель данной работы состоит в исследовании эффекта метшшитрозомочевины (МНМ) на покоящихся и ФГА-стимулированных лимфоцитах здоровых доноров и больных гинекологическим раком. Цитотоксический эффект МНМ (апоптотическая гибель лимфоцитов) оценивался двумя показателями - взаимодействием клеток с аннексином V, ассоциированным с FITC, и по морфологическим изменениям ядра клеток после их окрашивания смесью двух ДНК-тропных красителей. Генотоксический эффект МНМ, вторичныедвунитевые разрывы ДНК, определялся с помощью метода нейтральных ДНК-комет, модифицированного для подсчета комет, формируемых только делящимися лимфоцитами, меченными ВгШг. Доля таких комет представлялась как индекс пролиферации клеток. Показано, что покоящиеся лимфоциты были устойчивы к гено- и цитотоксическому эффектам МНМ. В пролиферирующих клетках в ответ на действие МНМ формировались вторичные разрывы ДНК (р < 0.01) и возрастала частота апоптотических клеток (р < 0.05). Генотоксический эффект МНМ на стимулированных лимфоцитах больных гинекологическим раком был в 4 раза ниже, чем на лимфоцитах здоровых доноров. Лимфоциты больных не изменяли пролиферативный индекс в ответ на действие МНМ; в лимфоцитах здоровых доноров МНМ снижала пролиферативный индекс в 2 раза в ответ на МНМ. Полученные результаты обнаруживают связь между гено- и цитотоксическим ответом лимфоцитов на действие МНМ и гинекологическим раком. Поскольку Генотоксический эффект МНМ проявляюттолько делящиеся лимфоциты и он обнаруживается сутки спустя после действия агента, мы полагаем, что он связан с пострепли-кативной репарацией (MMR), субстратом которой является О6-метилгуанин. Дефицит MMR в лимфоцитах больных обуславливает их нечувствительность к действию МНМ. Генотоксический ответ лимфоцитов на действие МНМ может служить маркером MMR и ассоциированного с дефицитом MMR гинекологического рака.