ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ESI-MS И ИЗОТОПНО МЕЧЕННЫХ АМИНОКИСЛОТНЫХ СТАНДАРТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ БЕЛКОВ

摘要

Представлен метод количественного определения белков и олигопептидов на пикомольном уровне применительно к ESI-MS. Суть метода заключается в определении концентрации отдельных аминокислот, входящих в состав анализируемого белка, после его гидролиза (кислотного или ферментативного) путем измерения относительных интенсивностей ионов аминокислоты и ее изотопно меченного аналога. В качестве внутренних стандартов использованы 18{sup left}O-содержащие аналоги 5 аминокислот, а также дейтерированный лизин и модифицированный азотом 15{sup left}N аргинин. Метод применим для белков с известным аминокислотным составом. Предлагаемый подход опробован на примере определения концентраций бычьего сывороточного альбумина, химотрипсиногена, проинсулина.