ОПТИМИЗАЦИЯ МЕТОДА ПЦР В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ РЕГИСТРАЦИИ УРОВНЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ РИСА, ОТВЕТСТВЕННЫХ ЗА АССИ

摘要

Разработан метод оценки экспрессии генов риса, ответственных за ассимиляцию азота, с использованием методики RT-PCR (полимеразная цепная реакция в режиме реального времени) и путем оптимизации концентрации Mg~(2+), лозы Taq фермента, концентрации красителя SYBR Green I (SGI) и температурыотжига. На основе этой качественной методики исследовали изменение уровня экспрессии OsAMTl.I (одного из генов, ответственных за поглощение азота) и OsGltl (одного из генов, ответственных за метаболизм азота) в проростках риса при различном снабжении азотом. Проведенные исследования показали, что, используя флуоресцентную методику RT-PCR и оптимизируя параметры полимеразной цепной реакции в соответствии с характеристиками генов-мишеней можно быстро количественно оценить экспрессию генов, ответственных за транспорт азота и его метаболизм в проростках риса, даже при малом количестве генов.